【導(dǎo)讀】批準人質(zhì)量負責人。四川海蓉藥業(yè)有限公司

　　

【正文】 25℃ 倒置培養(yǎng) 5 天 點計菌落數(shù)。平行制備 2 個平皿。 — 取 小于 100cfu 的銅綠假單胞菌 菌懸液、金黃色葡萄球菌菌懸液、枯草芽孢桿菌菌懸液 、白色念珠菌菌懸液、黑曲霉菌懸液 各 1ml，注入平皿中，立即傾注 胰酪大豆胨瓊脂 培養(yǎng)基約 15～ 20ml，混勻，凝固，于 30～ 35℃ 倒置培養(yǎng) 3 天 點計菌落數(shù)。各平行制備 2 個平皿。 — 取 小于 100cfu 的 白色念珠菌菌懸液、黑曲霉菌懸液各 1ml，立即傾注 沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基各 15～ 20ml，混勻，凝固，于 20～ 25℃ 倒置培養(yǎng) 5 天 點計菌落數(shù)。各平行制備 2 個平皿。 — 取 的供試液 1ml，注入平皿中，分別立即傾注 15～ 20 ml 溫度不超過 45℃胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基 30～ 35℃ 倒置培養(yǎng) 3 天點計菌落數(shù)，沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 20～ 25℃ 倒置培養(yǎng) 5 天點計菌落數(shù)。各組平行制備 2 個平皿。 計算公式： 判定標準： 實驗組、稀釋劑對照組（如有）的菌數(shù) 回收率應(yīng)在 ～ 2 之間。若各試驗菌的回收 率均符合規(guī)定，照所用的供試液制備方法及計數(shù)方法進行該供試品的需氧菌總數(shù)、 霉菌 和酵母菌 總 數(shù) 計數(shù)。 試驗結(jié)果 供試品批號 、 、 。 稀釋劑對照組菌數(shù)的回收率＝ 稀釋劑對照組的平均菌落數(shù)－供試品對照組的平均菌落數(shù) 菌液組的平均菌落數(shù) 試驗組菌數(shù)的回收率＝ 試驗組的平均菌落數(shù)－供試品對照組的平均菌落數(shù) 菌液組的平均菌落數(shù) 揚子江藥業(yè)集團四川海蓉藥業(yè)有限公司 Yangtze River Pharmaceutical Group Sichuan Hairong Pharmaceutical Co.,Ltd 阿戈美拉汀片（ 25mg） 微生物限度方法驗證方案 Page 27 of 31 菌種類型 試驗 次數(shù) 菌液組 試驗組 供試品 對照組 回收率 銅綠假單胞菌 1 平均 2 平均 3 平均 金黃色葡萄球菌 1 平均 2 平均 3 平均 枯草芽孢桿菌 1 平均 2 平均 3 平均 白色念珠菌（需氧菌驗證） 1 平均 2 平均 3 平均 黑曲霉（需氧菌驗證） 1 平均 2 平均 3 平均 白色念珠菌（霉菌、酵母菌驗證） 1 平均 2 平均 3 平均 黑曲霉（霉菌、酵母菌驗證） 1 平均 2 平均 3 平均 揚子江藥業(yè)集團四川海蓉藥業(yè)有限公司 Yangtze River Pharmaceutical Group Sichuan Hairong Pharmaceutical Co.,Ltd 阿戈美拉汀片（ 25mg） 微生物限度方法驗證方案 Page 28 of 31 結(jié)果判定： 驗證 人： 日期： 復(fù)核人： 日期： .（大腸埃希菌）的驗證 取 的供試液 ml（取相當于 1g 或 1ml 供試品的供試液） ， 小于 100cfu 的大腸埃希菌菌懸液 1ml，加 至 約 100ml 的 胰酪大豆胨液體 培養(yǎng)基，于 30～ 35℃ 培養(yǎng)18～ 24 小時。 取 無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液 10ml，加 至 約 100ml 的 胰酪大豆胨液體 培養(yǎng)基，于 30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 24 小時。 組 取 小于 100cfu 的 大腸埃希菌菌懸液 1ml，加 至 約 100ml 的 胰酪大豆胨液體 培養(yǎng)基，于 30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 24 小時。 取上述培養(yǎng)物 1ml，接種至含 100ml 麥康凱液體 培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)， 42～ 44℃ 培養(yǎng) 24～48 小時。取麥康凱 液體 培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂平板上 30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 72小時 。 檢查結(jié)果如下： 第一次試驗結(jié)果： 供試品批號 序號 步 驟 實驗組 陽性對照 組 陰性對照 組 1 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基， 30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 24 小時 揚子江藥業(yè)集團四川海蓉藥業(yè)有限公司 Yangtze River Pharmaceutical Group Sichuan Hairong Pharmaceutical Co.,Ltd 阿戈美拉汀片（ 25mg） 微生物限度方法驗證方案 Page 29 of 31 序號 步 驟 實驗組 陽性對照 組 陰性對照 組 2 麥康凱液體培養(yǎng)基， 42～ 44℃ 培養(yǎng) 24～ 48 小時 3 取 麥康凱液體培養(yǎng) 物劃線接種于 麥康凱瓊脂平板上 ， 30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 72 小時 。 若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，應(yīng)進行分離、純化及適宜的鑒定試驗 , 確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，判未檢出大腸埃希菌。 4 分離純化、染色鏡檢、生化試驗等 。 結(jié)果： 第二次試驗結(jié)果： 供試品批號 序號 步 驟 實驗組 陽性對照 組 陰性對照 組 1 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基， 30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 24 小時 2 麥康凱液體培養(yǎng)基， 42～ 44℃ 培養(yǎng) 24～ 48 小時 3 取 麥康凱液體培養(yǎng) 物劃線接種于 麥康凱瓊脂平板上 ， 30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 72 小時 。 若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，應(yīng)進行分離、純化及適宜的鑒定試驗 , 確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，判未檢出大腸埃希菌。 4 分離純化、染色鏡檢、生化試驗等 。 結(jié)果： 第三次試驗結(jié)果： 供試品批號 序號 步 驟 實驗組 陽性對照 組 陰性對照 組 1 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基， 30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 24 小時 2 麥康凱液體培養(yǎng)基， 42～ 44℃ 培養(yǎng) 24～ 48 小時 揚子江藥業(yè)集團四川海蓉藥業(yè)有限公司 Yangtze River Pharmaceutical Group Sichuan Hairong Pharmaceutical Co.,Ltd 阿戈美拉汀片（ 25mg） 微生物限度方法驗證方案 Page 30 of 31 序號 步 驟 實驗組 陽性對照 組 陰性對照 組 3 取 麥康凱液體培養(yǎng) 物劃線接種于 麥康凱瓊脂平板上 ， 30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 72 小時 。 若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，應(yīng)進行分離、純化及適宜的鑒定試驗 , 確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，判未檢出大腸埃希菌。 4 分離純化、染色鏡檢、生化試驗等 。 結(jié)果： 標準：陽性對照和試驗組應(yīng)檢出大腸埃希菌，陰性對照應(yīng)無菌生長。 結(jié)果判定： 驗證 人： 日期： 復(fù)核人： 日期： 備注：采用以上供試液制備方法，分別對需氧菌、霉菌及酵母菌計數(shù)和控制菌檢查法進行方法驗證時，若結(jié)果不能達到各標準時，應(yīng)繼續(xù)采用其他方法（如培養(yǎng)基稀釋法、薄膜過濾法等）消除供試品的抑菌活性，重新進行方法驗證。 揚子江藥業(yè)集團四川海蓉藥業(yè)有限公司 Yangtze River Pharmaceutical Group Sichuan Hairong Pharmaceutical Co.,Ltd 阿戈美拉汀片（ 25mg） 微生物限度方法驗證方案 Page 31 of 31 七、驗證異常情況處理 本次驗證實施人員異動情況： □ 發(fā)生變化 □ 未發(fā)生變化 ，發(fā)生異動情況描述如下： 本次驗證測試儀器校驗情況： □ 符合要求 □ 不符合要求 ，不符合處理情況描述如下：