【正文】 揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)四川海蓉藥業(yè)有限公司 Yangtze River Pharmaceutical Group Sichuan Hairong Pharmaceutical Co.,Ltd 阿戈美拉汀片（ 25mg） 微生物限度方法驗證方案 Page 31 of 31 七、驗證異常情況處理 本次驗證實施人員異動情況： □ 發(fā)生變化 □ 未發(fā)生變化 ，發(fā)生異動情況描述如下： 本次驗證測試儀器校驗情況： □ 符合要求 □ 不符合要求 ，不符合處理情況描述如下： 。 結(jié)果： 標(biāo)準(zhǔn)：陽性對照和試驗組應(yīng)檢出大腸埃希菌，陰性對照應(yīng)無菌生長。 若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，應(yīng)進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定試驗 , 確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，判未檢出大腸埃希菌。 4 分離純化、染色鏡檢、生化試驗等 。 結(jié)果： 第二次試驗結(jié)果： 供試品批號 序號 步 驟 實驗組 陽性對照 組 陰性對照 組 1 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基， 30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 24 小時 2 麥康凱液體培養(yǎng)基， 42～ 44℃ 培養(yǎng) 24～ 48 小時 3 取 麥康凱液體培養(yǎng) 物劃線接種于 麥康凱瓊脂平板上 ， 30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 72 小時 。 若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，應(yīng)進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定試驗 , 確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，判未檢出大腸埃希菌。取麥康凱 液體 培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂平板上 30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 72小時 。 組 取 小于 100cfu 的 大腸埃希菌菌懸液 1ml，加 至 約 100ml 的 胰酪大豆胨液體 培養(yǎng)基，于 30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 24 小時。 稀釋劑對照組菌數(shù)的回收率＝ 稀釋劑對照組的平均菌落數(shù)－供試品對照組的平均菌落數(shù) 菌液組的平均菌落數(shù) 試驗組菌數(shù)的回收率＝ 試驗組的平均菌落數(shù)－供試品對照組的平均菌落數(shù) 菌液組的平均菌落數(shù) 揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)四川海蓉藥業(yè)有限公司 Yangtze River Pharmaceutical Group Sichuan Hairong Pharmaceutical Co.,Ltd 阿戈美拉汀片（ 25mg） 微生物限度方法驗證方案 Page 27 of 31 菌種類型 試驗 次數(shù) 菌液組 試驗組 供試品 對照組 回收率 銅綠假單胞菌 1 平均 2 平均 3 平均 金黃色葡萄球菌 1 平均 2 平均 3 平均 枯草芽孢桿菌 1 平均 2 平均 3 平均 白色念珠菌（需氧菌驗證） 1 平均 2 平均 3 平均 黑曲霉（需氧菌驗證） 1 平均 2 平均 3 平均 白色念珠菌（霉菌、酵母菌驗證） 1 平均 2 平均 3 平均 黑曲霉（霉菌、酵母菌驗證） 1 平均 2 平均 3 平均 揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)四川海蓉藥業(yè)有限公司 Yangtze River Pharmaceutical Group Sichuan Hairong Pharmaceutical Co.,Ltd 阿戈美拉汀片（ 25mg） 微生物限度方法驗證方案 Page 28 of 31 結(jié)果判定： 驗證 人： 日期： 復(fù)核人： 日期： .（大腸埃希菌）的驗證 取 的供試液 ml（取相當(dāng)于 1g 或 1ml 供試品的供試液） ， 小于 100cfu 的大腸埃希菌菌懸液 1ml，加 至 約 100ml 的 胰酪大豆胨液體 培養(yǎng)基，于 30～ 35℃ 培養(yǎng)18～ 24 小時。若各試驗菌的回收 率均符合規(guī)定，照所用的供試液制備方法及計數(shù)方法進(jìn)行該供試品的需氧菌總數(shù)、 霉菌 和酵母菌 總 數(shù) 計數(shù)。各組平行制備 2 個平皿。各平行制備 2 個平皿。各平行制備 2 個平皿。平行制備 2 個平皿。平行制備 2 個平皿。平行制備 2 個平皿。平行制備 2 個平皿。平行制備 2 個平皿。平行制備 2 個平皿。平行制備 2 個平皿。 取上述制備好的供試液，加入試驗菌液、混勻，使每 1ml供試液或每張濾膜過濾 的供試液中含菌量不大于 100cfu。 揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)四川海蓉藥業(yè)有限公司 Yangtze River Pharmaceutical Group Sichuan Hairong Pharmaceutical Co.,Ltd 阿戈美拉汀片（ 25mg） 微生物限度方法驗證方案 Page 25 of 31 、霉菌及酵母菌計數(shù)（平皿法） 所加菌液的體積不得超過供試液體積的 1%。 ，應(yīng)在 2 小時之內(nèi)使用；若保存在 2~8℃ ，可在 24 小時內(nèi)使用。加入 35ml含 %（ ml/ml）聚山梨酯 80的 %無菌氯化鈉溶液或 無菌氯化鈉 蛋白胨緩沖液 ，將 孢子洗脫。 ， 20? 25℃ 培養(yǎng) 2～ 3 天；取此培養(yǎng)物用 %無菌氯化鈉溶液或 無菌氯化鈉 蛋白胨緩沖液 ，依次稀釋至 ，制成每 1ml含菌數(shù)為小于 100cfu 的菌懸液。供試液從制備至加入檢驗用培養(yǎng)基，不得超過 1 小時。 1:100 供試品 10ml，加 無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液至 100ml，充分振搖使混勻，作為 1:1000 的供試液。 培訓(xùn)時間 培訓(xùn)人 參加培訓(xùn)人員 溯源資料 確認(rèn)人： 確認(rèn)日期： 復(fù)核人： 復(fù)核日期： 揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)四川海蓉藥業(yè)有限公司 Yangtze River Pharmaceutical Group Sichuan Hairong Pharmaceutical Co.,Ltd 阿戈美拉汀片（ 25mg） 微生物限度方法驗證方案 Page 24 of 31 六、驗證內(nèi)容 10g，加 無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液至 100ml，充分振搖使混勻，作為 1:10 的供試液。 .《非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法》 (SOP202567)；《非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法》（ SOP202568） 檢測日期 房間名稱 房間編號 潔凈級 別 試驗溫度 相對溫度 環(huán)境測試報告書編號及結(jié)論 環(huán)境監(jiān)測報告復(fù)印件 微生物限度檢查室 12075 C+A 陽性室 12125 C+A ： 儀器及設(shè)備名稱 型號 設(shè)備管理編號 校驗有效期至 生產(chǎn)廠家 校準(zhǔn)報告 復(fù)印件 電子天平 pH 計 立式壓力蒸汽滅菌器 （制備無菌器具） 恒溫干燥箱 自動漩渦混合儀 生化培養(yǎng)箱 （需氧菌） 生化培養(yǎng)箱 （霉菌和酵母菌） 揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)四川海蓉藥業(yè)有限公司 Yangtze River Pharmaceutical Group Sichuan Hairong Pharmaceutical Co.,Ltd 阿戈美拉汀片（ 25mg） 微生物限度方法驗證方案 Page 22 of 31 儀器及設(shè)備名稱 型號 設(shè)備管理編號 校驗有效期至 生產(chǎn)廠家 校準(zhǔn)報告 復(fù)印件 生化培養(yǎng)箱 （控制菌） 立式壓力蒸汽滅菌器 (滅活 ) 生物安全柜 凈化工作臺 菌種名稱 檢定菌編號 配制菌液編號 菌液有效期 至 菌種來源 金黃色葡萄球菌〔 CMCC（ B） 26003〕 大腸埃希菌〔 CMCC（ B） 44102〕 銅綠假單胞菌〔 CMCC（ B） 10104〕 枯草芽孢桿菌〔 CMCC（ B） 63501〕 白色念珠菌〔 CMCC（ F） 98001〕 黑曲霉〔 CMCC（ F） 98003〕 培養(yǎng)基名稱 配制批號 干粉批號 干粉來源 培養(yǎng)基適用性檢查報告復(fù)印件 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基 沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基 沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基