質(zhì)粒的提取與純化ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-05-03 18:24本頁(yè)面
【正文】 次。 ? 溶液應(yīng)該出現(xiàn)絮狀物，但不會(huì)出現(xiàn)局部沉淀。 ? 6. 于 13,000rpm離心 10 分鐘。 ? 如離心機(jī)轉(zhuǎn)速不夠可延長(zhǎng)離心時(shí)間，直至形成緊密的白色沉淀。 ? 7. 將步驟 6 離心后得到的上清液轉(zhuǎn)移到 Spin column 內(nèi)。于 6,000rpm離心 1 分鐘，并棄去接液管內(nèi)液體。 ? 8. 向 Spin column 內(nèi)加 650μl Wash Buffer，于 12，000g 離心 30～ 60 秒，并棄去接液管內(nèi)液體。 ? 9. 重復(fù)第 8 步一次。 ? 10. 再次于 12， 000rpm 離心 1 分鐘，然后將 Spin column 轉(zhuǎn)移到無菌的 離心管中。如不進(jìn)行該步離心，則無法保證離心柱內(nèi)殘液被徹底清除。 ? 11. 向 Spin column 內(nèi)加 20μl Elution Buffer、去離子水或 TE 溶液，并于室溫靜置 1 分鐘。 ? 可根據(jù)實(shí)驗(yàn)的實(shí)際需要決定洗脫液用量。 ? 12. 于 12， 000rpm離心 1 分鐘， 離心管內(nèi)溶液中含有質(zhì)粒 DNA。 ? 13. 提取的質(zhì)粒 DNA 可直接用于各類下游分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，如果不立即使用，請(qǐng)保存于 20℃ 。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論 ? 堿法提取質(zhì)粒是實(shí)驗(yàn)室最常用的質(zhì)粒提取方法之一，提取量較大，便于操作。 ? 如有蛋白質(zhì)殘留，干燥后不透明，而呈白色。
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