質粒dna的提取酶切及濃度檢測-資料下載頁
2025-05-26 18:28本頁面
【正文】 料與儀器 ? 質粒 ? 標準分子量片段 ( DNA Ladder) ? EcoRI 和 Hind Ⅲ 核酸內切酶（ Takara） ? EcoRI和 Hind Ⅲ 酶解緩沖液 (10 M buffer) ? 瓊脂糖 ? TBE或 TAE緩沖液 (10 ) ? 溴化乙啶染色液 (10mg/ml) ? 上樣液 (6 )： % 溴酚蘭， 40％ (W/V)蔗糖 水溶液 。 緩沖液 因為不同的酶所要求的最適反應條件不同 ， 所以一定要使用與酶相匹配的緩沖系統(tǒng) 。一般按照銷售酶的公司所提供的相應緩沖液 。雙酶切或多酶切時要考慮相容性緩沖液問題 ，一般公司會給用戶提供這方面的信息 。 EcoR I 酶切位點： GAATTC Hind Ⅲ 酶切位點： AAGGCT 質粒量（ ng） 緩沖液 (μl )* EcoR1 （ μl ） Hind Ⅲ （ μl ） 總體積 （ μl ） 200(5μl ) 1 10 * 緩沖液隨不同的酶而不同 ,本實驗用 M buffer。 置于 37℃ 水浴酶解 。酶解完成后，分別加入 3?l的上樣緩沖液 , 然后進行電泳分析。 1) 質粒 DNA的酶解 4. 實驗方法和步驟 實驗結果 1 2 3 M 1 2 3 M 1 2 3 1. 未酶切質粒； 2. EcoRI 單酶切； 3. EcoR1+Hind Ⅲ 雙酶切 M. DNA Marker.
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