質(zhì)粒dna的提取酶切及濃度檢測(已修改)
2025-06-07 18:28 本頁面
【正文】 ? 實驗 5 質(zhì)粒 DNA的提取 質(zhì)粒的概念 ? 質(zhì)粒：質(zhì)粒是細(xì)菌染色體外的遺傳物質(zhì)，大小在 1~200kb之間，大多是具有雙股閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)的 DNA分子，通常以超螺旋狀態(tài)存在于細(xì)胞漿中。 質(zhì)粒提取目的 ? PCR的模板 ? 質(zhì)粒作為克隆載體 ? (研究目的基因時，常需要提取質(zhì)粒 ) 質(zhì)粒提取的方法與原理 ? 堿裂解法 ? SDS裂解法 ? 煮沸裂解法 ? 氯化銫 溴化乙錠梯度離心法 ? 試劑盒法 5 堿裂解法 溶液 1 50mmol/L葡萄糖 ， 10mmol/L EDTA， 25mMTrisHCl 。 溶液 2 , 1%SDS 溶液 3 乙酸鉀溶液 (3M, pH=)： 60mL的 5mol/L KAc, ， H2O 6 1. 培養(yǎng)細(xì)菌：將帶有質(zhì)粒的大腸桿菌接種到 ， 37℃培養(yǎng) 12～ 16小時 。 2. 取液體培養(yǎng)液 Eppendorf管中 ，10000r/min離心 1min， 去掉上清液 ， 加入100?l溶液 1 3. 充分混勻放置 35分鐘 。 4. 加入 200?l新配制的 +1％ SDS（ 變性液 ） ， 加蓋顛倒 35次使之混勻 ， 冰上放置 5min。 質(zhì)粒小量提取的方法（手工提?。? 7 4. 加入 150 ?
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