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質(zhì)粒dna的提取酶切及濃度檢測-在線瀏覽

2025-07-13 18:28本頁面
  

【正文】 HCl 。 2. 取液體培養(yǎng)液 Eppendorf管中 ,10000r/min離心 1min, 去掉上清液 , 加入100?l溶液 1 3. 充分混勻放置 35分鐘 。 質(zhì)粒小量提取的方法(手工提?。? 7 4. 加入 150 ? l乙酸鉀溶液 (溶液 III),加蓋后顛倒35次混勻, 冰上放置 5min。 6. 沉淀用 70%乙醇清洗一次, 12022r/min離心 5min,棄去上清液,小管倒置于吸水紙上,除盡乙醇,室溫自然干燥 。 8. 將分離出的質(zhì)粒 DNA置于 20℃ 保存?zhèn)溆谩? ? 優(yōu)點:操作簡便、節(jié)約時間、性 /價比高。 實驗操作步驟 ? 增殖細(xì)菌、擴增質(zhì)粒 ? 裂解菌體、獲取質(zhì)粒 ? 抽提質(zhì)粒、分離純化 ? 結(jié)果鑒定 對于未經(jīng)酶切的質(zhì)粒來說 , 常會出現(xiàn)兩條電泳帶 1) ( 松弛 ) 螺旋狀質(zhì)粒 DNA帶 2) 超螺旋狀質(zhì)粒 DNA的帶 以超螺旋狀質(zhì)粒 DNA居多 , 移動速度也最快 。 如果提取的質(zhì)粒很好時 , 這條帶會很弱 , 有時看不到 。 2. 相關(guān)基礎(chǔ)知識 限制性核酸內(nèi)切酶:是一類能識別雙鏈 DNA分子特異性核酸序列的 DNA水解酶 。限制性核酸內(nèi)切酶不僅是 DNA重組中重要的工具 , 而且還可以用于基因組酶切圖譜的鑒定 。 由于這類限制性內(nèi)切酶的識別和切割的核苷酸都是專一的 。 這種酶識別的專一核苷酸順序最常見的是 4個或 6個核苷酸 II 型限制性內(nèi)切酶的識別順序是一個回文對稱順序 , 即有一個
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