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質(zhì)粒dna的提取和鑒定-在線瀏覽

2024-12-20 10:27本頁面
  

【正文】 所有分離質(zhì)粒 DNA的方法都包括 3個基本步驟:培養(yǎng)細(xì)菌使 質(zhì)粒擴(kuò)增 ;收集和裂解細(xì)菌; 分離 質(zhì)粒DNA(有時還要求 純化 質(zhì)粒 DNA,根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需 ) ? 選擇哪一種方法主要取決于以下幾個因素:質(zhì)粒的大小、大腸桿菌菌株、裂解后用于純化的技術(shù)和實(shí)驗(yàn)要求 堿裂解法 基本原理: 1. 當(dāng)菌體在 NaOH和 SDS溶液中裂解時,蛋白質(zhì)與 DNA發(fā)生變性,當(dāng)加入中和液后,質(zhì)粒 DNA分子能夠迅速復(fù)性,呈溶解狀態(tài),離心時留在上清中;蛋白質(zhì)與染色體 DNA不復(fù)性而呈絮狀,離心時可沉淀下來 , DNA分子的遷移取決于分子篩效應(yīng),即 DNA分子本身的 大小 和 構(gòu)型 (相對分子質(zhì)量不同的 DNA片段泳動速度不一樣 ),且 DNA分子的遷移速度與相對分子質(zhì)量的對數(shù)值成反比關(guān)系。 12
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