質(zhì)粒dna的酶切鑒定-在線瀏覽
2025-07-13 18:28本頁(yè)面
【正文】 由于這類限制性內(nèi)切酶的識(shí)別和切割的核苷酸都是專一的 。 這種酶識(shí)別的專一核苷酸順序最常見的是 4個(gè)或 6個(gè)核苷酸 ，少數(shù)也有識(shí)別 5個(gè)核苷酸以及 7個(gè) 、 8個(gè) 、 9個(gè) 、10個(gè)和 11個(gè)核苷酸的 。 這種酶的切割可以有兩種方式： 粘性末端；是交錯(cuò)切割，結(jié)果形成兩條單鏈末端，這種末端的核苷酸順序是互補(bǔ)的，可形成氫鍵，所以稱為粘性末端。 _和‘ 表示在雙鏈上交錯(cuò)切割的位置 ， 切割后生成 5’…… G和AATTC…… 3’、 3’…… CTTAA和 G…… 5’二個(gè) DNA片段 ， 各有一個(gè)單鏈末端 ， 二條單鏈?zhǔn)腔パa(bǔ)的 ， 其斷裂的磷酸二酯鍵以及氫鍵可通過(guò) DNA連接酶的作用而 “ 粘合 ” 。例如 EcoRV 的識(shí)別位置是： 5’…… GAT’|ATC …… 3’ 3’…… CTA’|TAG …… 5’ 切割后形成 5’…… GAT和 ATC …… 3’、 3’…… CTA和 TAG …… 5’。 平頭末端： 第三類（ III型 ）限制性內(nèi)切酶 也有專一的識(shí)別順序，但不是對(duì)稱的回文順序 ,在識(shí)別順序旁邊幾個(gè)核苷酸對(duì)的固定位置上切割雙鏈。因此，這種限制性內(nèi)切酶切割后產(chǎn)生的一定長(zhǎng)度 DNA片段，具有各種單鏈末端。 同裂酶： 有時(shí)兩種限制性內(nèi)切酶的識(shí)別核苷酸順序和切割位置都相同，有時(shí)其差別只在于當(dāng)識(shí)別順序中有甲基化的核苷酸時(shí)，一種限制性內(nèi)切酶可以切割，另一種則不能。這些有相同切點(diǎn)的酶稱為 同裂酶（同切酶或異源同工酶） 。如 Xba Nhe1以及 Spe1切割的 DNA序列不同，但均給出相同的 “ CTAG”粘性末端。 同尾酶： 4) 限制性核酸內(nèi)切酶的命名法 ? 用屬名的頭一個(gè)字母和種名的頭兩個(gè)字母表示寄主菌的物種名稱 ， 如 E. coli 用 Eco表示 ， 所以用斜體字 。 ? 如果一種特殊的寄主菌株 ， 具有幾個(gè)不同的限制與修飾體 ， 則以羅馬數(shù)字表示 ， 如HindⅠ , HindⅡ ， HindⅢ 等 。 瓊脂糖凝膠電泳 瓊脂糖凝膠電泳是利用瓊脂糖溶化再凝固后能形成帶有一定孔隙的固體基質(zhì)的特性，其密度取決于瓊脂糖的濃度。 影響 DNA在瓊脂糖中遷移率的因素： DNA分子的大小、 DNA的構(gòu)象、電壓、電場(chǎng)方向、堿基組成、嵌入的燃料以及電泳緩沖液的組成。 %的瓊脂糖凝膠能很好地分辨 125kb的片段； % 的瓊脂糖凝膠用于分辨較大片段的 DNA (20100kb） ；對(duì)于小片段的 DNA() 可用%或更高濃度的凝膠進(jìn)行分離 。 EB：即 3,8二氨基 5乙基 6苯基菲錠溴鹽
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