質(zhì)粒dna的酶切鑒定-展示頁(yè)
2025-06-04 18:28本頁(yè)面
【正文】 如 EcoRI的識(shí)別順序?yàn)椋? 5’…… G’AA|TT_C …… 3’ 3’…… C_TT|AA’G …… 5’ 垂直線表示中心對(duì)稱軸 ， 從兩側(cè) “ 讀 ” 核苷酸順序都是GAATTC或 CTTAAG， 這就是回文順序 （ palindrome） 。 II 型限制性內(nèi)切酶的識(shí)別順序是一個(gè)回文對(duì)稱順序 ， 即有一個(gè)中心對(duì)稱軸 ， 從這個(gè)軸朝二個(gè)方向 “ 讀 ” 都完全相同 。 因此 ， 這種限制性內(nèi)切酶是 DNA重組技術(shù)中最常用的工具酶之一 。 第二類 (II型 )限制性內(nèi)切酶 能識(shí)別專一的核苷酸順序 ， 并在該順序內(nèi)的固定位置上切割雙鏈 。這類限制性內(nèi)切酶在 DNA重組技術(shù)或基因工程中用處不大，無(wú)法用于分析 DNA結(jié)構(gòu)或克隆基因。 這種現(xiàn)象被稱為寄主控制的限制與修飾現(xiàn)象。 1) 寄主控制的限制與修飾現(xiàn)象 2) 核酸限制性內(nèi)切酶的類型 3) 核酸限制性內(nèi)切酶的基本特性 4) 同裂酶和同尾酶 5) 核酸限制性內(nèi)切酶的命名法 6) 影響核酸限制性內(nèi)切酶活性的因素 1) 寄主控制的限制與修飾現(xiàn)象 限制與修飾系統(tǒng)是細(xì)胞的一種防衛(wèi)手段。 是體外剪切基因片段的重要工具 ， 所以常常與核酸聚合酶 、 連接酶以及末端修飾酶等一起稱為工具酶 。實(shí)驗(yàn)二 質(zhì)粒 DNA的酶切鑒定 及瓊脂糖凝膠電泳 1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵? 學(xué)習(xí)和掌握限制性內(nèi)切酶的特性、酶解和瓊脂糖凝膠電泳的操作方法，并理解限制性內(nèi)切酶是 DNA重組技術(shù)的關(guān)鍵工具，瓊脂糖凝膠電泳是分離鑒定 DNA片段的有效方法。 2. 相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí) 限制性核酸內(nèi)切酶：是一類能識(shí)別雙鏈 DNA分子特異性核酸序列的 DNA水解酶 。限制性核酸內(nèi)切酶不僅是 DNA重組中重要的工具 ， 而且還可以用于基因組酶切圖譜的鑒定 。 各種細(xì)菌都能合成一種或幾種能夠切割 DNA雙鏈的核酸內(nèi)切酶， 它們以此來(lái)限制外源 DNA存在于自身細(xì)胞內(nèi)，但合成 這種酶的細(xì)胞自身的 DNA不受影響，因?yàn)檫@種細(xì)胞還合成了一種修飾酶，對(duì)自身的 DNA進(jìn)行了修飾，限制性酶對(duì)修飾過(guò)的 DNA不能起作用。 2)限制性核酸內(nèi)切酶的類型及特性 按限制酶的組成、與修飾酶活性關(guān)系 以及 切斷核酸的情況不同，分為三類： Ⅰ 型 Ⅱ 型 * Ⅲ 型 第一類（ I型）限制性內(nèi)切酶 能識(shí)別專一的核苷酸順序，并在識(shí)別點(diǎn)附近的一些核苷酸上切割 DNA分子中的雙鏈，但是切割的核苷酸順序沒(méi)有專一性，是隨機(jī)的。這類酶如 EcoB、 EcoK等。
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