質(zhì)粒酶切鑒定ppt課件-展示頁
2025-06-04 00:15本頁面
【正文】 段 。是體外剪切基因片段的重要工具，所以常常與核酸聚合酶、連接酶以及末端修飾酶等一起稱為工具酶。 質(zhì)粒 DNA的酶切鑒定及瓊脂糖凝膠電泳1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?學(xué)習(xí)和掌握限制性內(nèi)切酶的特性、酶解和瓊脂糖凝膠電泳的操作方法，并理解限制性內(nèi)切酶是 DNA重組技術(shù)的關(guān)鍵工具，瓊脂糖凝膠電泳是分離鑒定 DNA片段的有效方法。 2. 相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí) 限制性核酸內(nèi)切酶：是一類能識(shí)別雙鏈 DNA分子特異性核酸序列的 DNA水解酶。限制性核酸內(nèi)切酶不僅是 DNA重組中重要的工具，而且還可以用于基因組酶切圖譜的鑒定。 各種細(xì)菌都能合成一種或幾種能夠切割 DNA雙鏈的核酸內(nèi)切酶， 它們以此來限制外源 DNA存在于自身細(xì)胞內(nèi)，但合成 這種酶的細(xì)胞自身的 DNA不受影響，因?yàn)檫@種細(xì)胞還合成了一種修飾酶，對(duì)自身的 DNA進(jìn)行了修飾，限制性酶對(duì)修飾過的 DNA不能起作用。2)限制性核酸內(nèi)切酶的類型及特性按限制酶的組成、與修飾酶活性關(guān)系 以及 切斷核酸的情況不同，分為三類 ： Ⅰ 型 Ⅱ 型 * Ⅲ 型第一類（ I型）限制性內(nèi)切酶 能識(shí)別專一的核苷酸順序，并在識(shí)別點(diǎn)附近的一些核苷酸上切割 DNA分子中的雙鏈，但是切割的核苷酸順序沒有專一性，是隨機(jī)的。這類酶如 EcoB、 EcoK等。由于這類限制性內(nèi)切酶的識(shí)別和切割的核苷酸都是專一的。這種酶識(shí)別的專一核苷酸順序最常見的是4個(gè)或 6個(gè)核苷酸，少數(shù)也有識(shí)別 5個(gè)核苷酸以及 7個(gè)、 8個(gè)、 9個(gè)、 10個(gè)和 11個(gè)核苷酸的。這種酶的切割可以有兩種方式：粘性末端；是交錯(cuò)切割，結(jié)果形成兩條單鏈末端，這種末端的核苷酸順序是互補(bǔ)的，可形成氫鍵，所以稱為粘性末端。 _和 ‘表示在雙鏈上交錯(cuò)切割的位置，切割后生成 5’……G 和AATTC……3’ 、 3’……CTTAA 和 G……5’ 二個(gè) DNA片段，各有一個(gè)單鏈末端，二條單鏈?zhǔn)腔パa(bǔ)的，其斷裂的磷酸二酯鍵以及氫鍵可通過 DNA連接酶的作用而 “ 粘合 ” 。例如 EcoRV 的識(shí)別位置是： 5’…… GAT’|ATC …… 3’3’…… CTA’|TAG …… 5’ 切割后形成 5’…… GAT 和 ATC …… 3’、 3’…… CTA 和 TAG …… 5’ 。平頭末端：第三類（ III型 ）限制性內(nèi)切酶 也有專一的識(shí)別順序，但不是對(duì)稱的
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