《質(zhì)粒酶切鑒定》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 不能應(yīng)用于基因克隆。 這種末端同樣可以通過 DNA連接酶連接起來。如 EcoRI的識(shí)別順序?yàn)椋?5’…… G’AA|TT_C ……3’ 3’…… C_TT|AA’G …… 5’垂直線表示中心對稱軸，從兩側(cè) “ 讀 ” 核苷酸順序都是GAATTC或 CTTAAG， 這就是回文順序（ palindrome）。因此，這種限制性內(nèi)切酶是 DNA重組技術(shù)中最常用的工具酶之一。這類限制性內(nèi)切酶在 DNA重組技術(shù)或基因工程中用處不大，無法用于分析 DNA結(jié)構(gòu)或克隆基因。1) 寄主控制的限制與修飾現(xiàn)象2) 核酸限制性內(nèi)切酶的類型3) 核酸限制性內(nèi)切酶的基本特性4) 同裂酶和同尾酶5) 核酸限制性內(nèi)切酶的命名法6) 影響核酸限制性內(nèi)切酶活性的因素1) 寄主控制的限制與修飾現(xiàn)象限制與修飾系統(tǒng)是細(xì)胞的一種防衛(wèi)手段 。 質(zhì)粒 DNA的酶切鑒定及瓊脂糖凝膠電泳1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?學(xué)習(xí)和掌握限制性內(nèi)切酶的特性、酶解和瓊脂糖凝膠電泳的操作方法，并理解限制性內(nèi)切酶是 DNA重組技術(shù)的關(guān)鍵工具，瓊脂糖凝膠電泳是分離鑒定 DNA片段的有效方法。限制性核酸內(nèi)切酶不僅是 DNA重組中重要的工具，而且還可以用于基因組酶切圖譜的鑒定。2)限制性核酸內(nèi)切酶的類型及特性按限制酶的組成、與修飾酶活性關(guān)系 以及 切斷核酸的情況不同，分為三類 ： Ⅰ 型 Ⅱ 型 * Ⅲ 型第一類（ I型）限制性內(nèi)切酶 能識(shí)別專一的核苷酸順序，并在識(shí)別點(diǎn)附近的一些核苷酸上切割 DNA分子中的雙鏈，但是切割的核苷酸順序沒有專一性，是隨機(jī)的。由于這類限制性內(nèi)切酶的識(shí)別和切割的核苷酸都是專一的。這種酶的切割可以有兩種方式：粘性末端；是交錯(cuò)切割，結(jié)果形成兩條單鏈末端，這種末端的核苷酸順序是互補(bǔ)的，可形成氫鍵，所以稱為粘性末端。例如 EcoRV 的識(shí)別位置是： 5’…… GAT’|ATC …… 3’3’…… CTA’|TAG …… 5’ 切割后形成 5’…… GAT 和 ATC …… 3’、 3’…… CTA 和 TAG …… 5’ 。因此，這種限制性內(nèi)切酶切割后產(chǎn)生的一定長度 DNA片段，具有各種單鏈末端。這些有相同切點(diǎn)的酶稱為 同裂酶（同切酶或異源同工酶） 。同尾酶：4) 限制性核酸內(nèi)切酶的命名法v 用屬名的頭一個(gè)字母和種名的頭兩個(gè)字母表示寄主菌的物種名稱，如 E. co
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