《質(zhì)粒酶切鑒定》ppt課件-預(yù)覽頁
【正文】 li 用 Eco表示，所以用斜體字。瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳是利用瓊脂糖溶化再凝固后能形成帶有一定孔隙的固體基質(zhì)的特性，其密度取決于瓊脂糖的濃度。 % 的瓊脂糖凝膠能很好地分辨125kb的片段； % 的瓊脂糖凝膠用于分辨較大片段的 DNA (20100kb）； 對(duì)于小片段的 DNA() 可用% 或更高濃度的凝膠進(jìn)行分離。由于 EB分子 的插入，在紫外光的照射下，凝膠電泳中的 DNA條帶呈現(xiàn)出 紅色熒光，易于檢測(cè)。InsertEcoR1Xho1質(zhì)粒1 kb DNA Ladder不能對(duì)DNA質(zhì)量進(jìn)行精確定量分析，但可以通過與相近的條帶進(jìn)行比較估算出大概的數(shù)據(jù)。TCGA_G10H buffer: 500mM TrisHCl() 100mM MgCl2 10mM Dithiothreitol 1000mM NaCl酶活性的定義：一個(gè)活性單位（ U)， 是指在 50?l反應(yīng)體系中， 37oC的條件下，經(jīng)過 1小時(shí)的反應(yīng)時(shí)間，將 1?g DNA 完全酶解所需要的酶量。電泳儀，電泳槽，紫外透射儀，凝膠成像儀，一次性塑料手套等4. 實(shí)驗(yàn)方法和步驟 質(zhì)粒量（ ng）緩沖液(μl )*EcoR1（ μl）Xho1（ μl）H2O(μl )總體積（ μl）I 200 2 0 0 1719 20II 200 2 0 1517 20III 200 2 1416 20* 緩沖液隨不同的酶而不同 ,本實(shí)驗(yàn)用 H buffer。3） 膠板的制備取有機(jī)玻璃內(nèi)槽，洗凈、晾干；取紙膠條 (寬約 1cm)， 將有機(jī)玻璃內(nèi)槽置于一水平位置模具上，放好梳子。4） 加樣用微量加樣器將上述樣品分別加入膠板的樣品孔內(nèi)。5） 電泳（帶上手套操作）? 加完樣后的凝膠板即可通電進(jìn)行電泳；? 建議在 80～ 100V的電壓下電泳；? 當(dāng)溴酚蘭移動(dòng)到距離膠板下沿約 1cm處停止電泳；? 將凝膠放入 溴化乙啶（ EB〕 工作液（?g/ml左右）中染色約 20min。6） 觀察與拍照在紫外燈 (310nm波長(zhǎng) )下觀察染色后的凝膠。拍照電泳圖譜時(shí)，可采用快速凝膠成象系統(tǒng)。Relaxed circleLinearized formSupercoiled form
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