動物肝臟dna提取和鑒定-在線瀏覽
2025-07-13 04:03本頁面
【正文】 部分核糖核蛋白分離開來。用兩倍體積 95％乙醇溶液可將 DNA鈉鹽沉淀出來。 純的 DNA樣品的獲得 ?為了防止 DNA酶的降解，提取時可加入適量EDTA（乙二胺四乙酸）、檸檬酸，以降低DNA酶的活性。 ?保存：將 DNA于濾紙上干燥 ， 溶于 1mlTE中低溫保存 。 ?瓊脂糖 英文名 agarose， 是從 瓊脂 中提取出來的，由 半乳糖 和 L 半乳糖 相互結(jié)合的 鏈狀多糖 。但 瓊脂糖含硫酸根比瓊脂少 ， 電滲作用 降低，因而分離效果明顯提高。 ?DNA分子泳動速率的大小除與 DNA分子的帶電量有關(guān)外，還與 DNA分子的大小和空間構(gòu)象有關(guān)（瓊脂糖凝膠的 分子篩效應(yīng) ）。 ?溴化乙啶 是一種熒光染料，可插入 DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的兩個堿基對之間，與 DNA分子形成絡(luò)合物，在紫外光的激發(fā)下發(fā)出橙黃色的熒光。這兩方面的能量最終激發(fā) EB發(fā)出波長為 590nm的紅橙色熒光。 瓊脂糖凝膠電泳分離核酸的影響因素 （ 1） 核酸大小與瓊脂糖凝膠電泳分離的關(guān)系 凝膠中， DNA片段遷移率與 DNA分子大小 (堿基對的對數(shù) )成反比 (≤ 20kb) ， 因此通過已知大小的標(biāo)準(zhǔn)物移動的距離與未知片段的移動距離時行比較，便可測出未知片段的大小。 瓊脂糖濃度 /% 線狀 DNA大小 /kb 605 201 注： DNA片段在 5500bp之間時，一般用聚丙烯酰胺凝膠電泳（ PAGE） 進(jìn)行電泳分離。 （ 2）凝膠結(jié)構(gòu)均勻，對樣品吸附小，電泳圖譜清晰，分辨率高，重復(fù)性好。 （ 4）電泳后區(qū)帶易染色，樣品極易洗脫，便于定量測定。 因此， 瓊脂糖凝膠 電泳已成為分子生物學(xué)及基因工程研究中常用實(shí)驗(yàn)方法之一， DNA樣本的分離、純化、鑒定以及相對分子質(zhì)量測定常用瓊脂糖凝膠電泳。 EB是一種扁平分子 ， 它可以嵌入核酸的堿基之間 ， 在紫外線激發(fā)下 ， 發(fā)出紅橙色熒光 。 這兩方面的能量最終激發(fā) EB發(fā)射波長為 590nm的可見光 （ 紅橙區(qū) ） 。 （ 2） EB對核酸分子無破壞作用，這是其它染料所不能做 到的。 （ 4） 既可用于 DNA也可用于 RNA的檢測 。 （ 6） EBDNA復(fù)合物中的 EB發(fā)出的熒光比游離的 EB強(qiáng) 10倍 ， 因此不需洗凈凝膠中游離的 EB也可檢測出 DN
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