動(dòng)物肝臟dna提取和鑒定(編輯修改稿)
2025-06-22 04:03 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 （ 2） 核酸構(gòu)型與瓊脂糖凝膠電泳分離的關(guān)系 不同構(gòu)型 DNA的移動(dòng)速度次序?yàn)椋洪]環(huán) DNA直線 DNA開環(huán)的雙鏈環(huán)狀 DNA. （ 3） 不同大小的 DNA需要用不同濃度的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳分離。 瓊脂糖濃度 /% 線狀 DNA大小 /kb 605 201 注： DNA片段在 5500bp之間時(shí)，一般用聚丙烯酰胺凝膠電泳（ PAGE） 進(jìn)行電泳分離。 瓊脂糖凝膠電泳具有以下優(yōu)點(diǎn)： （ 1）操作簡(jiǎn)單、制備容易快速、凝膠機(jī)械性能好、電泳速度快、分離 DNA片段范圍廣、樣品不需事先處理就可以進(jìn)行電泳。 （ 2）凝膠結(jié)構(gòu)均勻，對(duì)樣品吸附小，電泳圖譜清晰，分辨率高，重復(fù)性好。 （ 3）瓊脂糖透明無(wú)紫外吸收，電泳過(guò)程和結(jié)果可直接用紫外光檢測(cè)及定量測(cè)定。 （ 4）電泳后區(qū)帶易染色，樣品極易洗脫，便于定量測(cè)定。制成干膜可長(zhǎng)期保存。 因此， 瓊脂糖凝膠 電泳已成為分子生物學(xué)及基因工程研究中常用實(shí)驗(yàn)方法之一， DNA樣本的分離、純化、鑒定以及相對(duì)分子質(zhì)量測(cè)定常用瓊脂糖凝膠電泳。 熒光染料 EB染色后，在紫外燈(λ305nm)下觀察到的電泳結(jié)果： * 熒光染料 EB染色的原理和優(yōu)點(diǎn)是什么 ？ 原理： EB： 即 3,8二氨基 5乙基 6苯基菲錠溴鹽(Ethidium Bromide)。 EB是一種扁平分子 ， 它可以嵌入核酸的堿基之間 ， 在紫外線激發(fā)下 ， 發(fā)出紅橙色熒光 。 激發(fā)的熒光的能量來(lái)源于兩個(gè)方面：一是核酸吸收 260nm的紫外線后將能量傳遞給 EB， 二是 EB本身吸收302nm和 360nm的紫外線的能量 。 這兩方面的能量最終激發(fā) EB發(fā)射波長(zhǎng)為 590nm的可見光 （ 紅橙區(qū) ） 。 優(yōu)點(diǎn)： （ 1） 染色比較簡(jiǎn)便 、 快捷 ， 一般在 10－ 15min就可反應(yīng) 。 （ 2） EB對(duì)核酸分子無(wú)破壞作用，這是其它染料所不能做 到的。 （ 3） EB靈敏度高 ， 可檢測(cè)出 10ng或更少的 DNA含量 。 （ 4） 既可用于 DNA也可用于 RNA的檢測(cè) 。 （ 5） EB可加到樣品中 ， 也可加到凝膠中 ， 可隨時(shí)用紫外 燈檢測(cè)電泳的進(jìn)程和效果 。
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1