質(zhì)粒dna的提取、酶切及檢測(cè)(編輯修改稿)
2025-06-22 18:28 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 沉淀用 70%乙醇 1mL洗滌兩次（ 振蕩混勻、離心 ） ? 12022rpm， 離心 2min ? 沉淀風(fēng)干 ? 沉淀用 20uL TE溶解， 200C保存 第二部分 質(zhì)粒酶切 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? ? 理解限制性?xún)?nèi)切酶是 DNA重組技術(shù)的關(guān)鍵工具 ? 掌握酶切的基本操作 實(shí)驗(yàn)原理 ? 制性?xún)?nèi)切酶將質(zhì)粒和外源基因用限制性?xún)?nèi)切酶酶切，再經(jīng)過(guò) DNA連接酶連接，便可獲得攜帶外源基因的重組質(zhì)粒，重組質(zhì)?？梢赞D(zhuǎn)移到另一個(gè)生物細(xì)胞中去，進(jìn)而復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和表達(dá)外源基因產(chǎn)物。限制性?xún)?nèi)切酶是能識(shí)別雙鏈 DNA 分子中的特定堿基順序，并以?xún)?nèi)切方式水解核酸中的磷酸二酯鍵的核酸水解酶。 ? EcoRⅠ 和 HindⅢ 的識(shí)別序列和切口是：EcoRⅠ :G↓ AATTC。HindⅢ :A↓ AGCTT 。G， A等核苷酸表示酶的識(shí)別序列，箭頭表示酶切口。 限制性核酸內(nèi)切酶的命名法 ? 用屬名的頭一個(gè)字母和種名的頭兩個(gè)字母表示寄主菌的物種名稱(chēng) ， 如 E. coli 用 Eco表示 ， 所以用斜體字 。 ? 用一個(gè)字母代表菌株或型 ， 如流感嗜血菌Rd菌株用 d， 即 Hind。 ? 如果一種特殊的寄主菌株 ， 具有幾個(gè)不同的限制與修飾體 ， 則以羅馬數(shù)字表示 ， 如HindⅠ , HindⅡ ， HindⅢ 等 。 II型限制性?xún)?nèi)切酶 能識(shí)別專(zhuān)一的核苷酸順序 ，并在該順序內(nèi)的固定位置上切割雙鏈 。 由于這類(lèi)限制性?xún)?nèi)切酶的識(shí)別和切割的核苷酸都是專(zhuān)一的 。 因此 ， 這種限制性?xún)?nèi)切酶是 DNA重組技術(shù)中最常用的工具酶之一 。 這種酶識(shí)別的專(zhuān)一核苷酸順序最常見(jiàn)的是 4個(gè)或 6個(gè)核苷酸 ， 少數(shù)也有識(shí)別 5個(gè)核苷酸以及 7個(gè) 、 8個(gè) 、 9個(gè) 、 10個(gè)和 11個(gè)核苷酸的 。 II 型限制性?xún)?nèi)切酶的識(shí)別順序是一個(gè)回文對(duì)稱(chēng)順序 ，即有一個(gè)中心對(duì)稱(chēng)軸 ， 從這個(gè)軸朝二個(gè)方向“ 讀 ” 都完全相同 。 這種酶的切割可以有兩種方式： 粘性末端；是交錯(cuò)切割，結(jié)果形成兩條單鏈末端，這種末端的核苷酸順序是互補(bǔ)的，可形成氫鍵，所以稱(chēng)為粘性末端。 如 EcoRI的識(shí)別順序?yàn)椋? 5’…… G’AA|TT_C …… 3’ 3’…… C_TT|AA’G …… 5’ 垂直線(xiàn)表示中心對(duì)稱(chēng)軸 ， 從
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