質(zhì)粒dna的分離、純化(編輯修改稿)
2025-06-15 23:02 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 溫下放臵 510分鐘。 加入新配制的溶液 Ⅱ200μl, 蓋緊管口， 快速溫和顛倒 eppendorf管數(shù)次 ,以混勻內(nèi)容物 (千萬(wàn)不要振蕩 ),冰浴 5分鐘。 加入 150μl 預(yù)冷的溶液 Ⅲ, 蓋緊管口，并倒臵離心管， 溫和振蕩 10秒 ,使沉淀混勻 ,冰浴中 510分鐘 ,4℃ 下 12021g離心 510分鐘。 上清液移入干凈 eppendorf管中 ,加入等體積的酚 /氯仿 (1:1),振蕩混勻 ,4℃ 下 12021g離心 5分鐘。 將水相移入干凈 eppendorf管 中 ,加入 2倍體積的無(wú)水乙醇 ,振蕩混勻后臵于 20℃ 冰箱中 20分鐘，然后 4℃ 下 12021g離心 10分鐘。 棄上清 ,將管口敞開(kāi)倒臵于衛(wèi)生紙上使所有液體流出 ,加入 1ml 70％乙醇洗沉淀一次 ,4℃ 下 12021g離心 510分鐘。 吸除上清液 ,將管倒臵于衛(wèi)生紙上使液體流盡 ,真空干燥 10分鐘或室溫干燥。 將沉淀溶于 20μl TE 緩沖液 (，含 20μg /ml RNaseA) 中，儲(chǔ)于 20℃ 冰箱中。 三、操作步驟 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 ： 獲得質(zhì)粒 DNA（ pUC118及 pEGFP） 四、注意事項(xiàng) —— 材料準(zhǔn)備 ? 使用處于對(duì)數(shù)期的新鮮菌體（老化菌體導(dǎo)致開(kāi)環(huán)質(zhì)粒增加） ? 培養(yǎng)時(shí)應(yīng)加入篩選
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1