質(zhì)粒dna的分離、純化-wenkub
2023-05-21 23:02:07 本頁面
【正文】 價閉環(huán)的質(zhì)粒 DNA在冷卻時即恢復(fù)其天然構(gòu)象； ? 變性染色體 DNA片段與變性蛋白質(zhì)和細胞碎片結(jié)合形成沉淀，而復(fù)性的超螺旋質(zhì)粒 DNA分子則以溶解狀態(tài)存在液相中，從而可通過離心將兩者分開。離心后，質(zhì)粒 DNA將在上清中，而基因組 DNA則與細胞碎片一起沉淀到離心管的底部。 棄上清 ,將管倒臵于衛(wèi)生紙上數(shù)分鐘 ,使液體流盡。 上清液移入干凈 eppendorf管中 ,加入等體積的酚 /氯仿 (1:1),振蕩混勻 ,4℃ 下 12021g離心 5分鐘。 將沉淀溶于 20μl TE 緩沖液 (，含 20μg /ml RNaseA) 中，儲于 20℃ 冰箱中。 ? 復(fù)性時間也不宜過長，否則會有基因組 DNA的污染。 4. 溶液 Ⅱ 在溫度較低時可能出現(xiàn)渾濁，臵于 37℃ 保溫片刻直至溶解為清亮的溶液 。 五、質(zhì)粒 DNA提取常見問題 ?問題二：質(zhì)粒純度不高，如何解決？ 原因 對 策 1. 簡要敘述溶液 Ⅰ 、溶液 Ⅱ 和溶液 Ⅲ 的作用，以及實驗中 分別加入上述溶液后，反應(yīng)體系出現(xiàn)的現(xiàn)象及其成因。重新純化DNA，去除蛋白、多糖、多酚等雜質(zhì) 2. 加入 RNaseA室溫放臵一段時間 3. 加入溶液 II 和 III后 防止劇烈振蕩，可能把基因組 DNA剪切成碎片從而混雜在質(zhì)粒中。 四、注意事項 —— 核酸
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