質(zhì)粒dna的分離、純化-展示頁(yè)
2025-05-22 23:02本頁(yè)面
【正文】 干燥溶解 沉淀 質(zhì)粒 DNA溶液 菌種 ： E. coli MV1184（含 pUC118）、 E. coli K12（含 pEGFP） 設(shè)備 ： eppendorf管、微量取液器 (20μl,200μl,1000μl) ， 臺(tái)式高速離心機(jī)， 渦旋振蕩器 試劑 ： LB液體培養(yǎng)基 、溶液 Ⅰ 、溶液 Ⅱ 、溶液 Ⅲ 、 RNA酶 A 、飽和酚 :氯仿＝ 1:1 二、材料、設(shè)備及試劑 溶液 Ⅰ ： 50mM 葡萄糖； 25mM Tris離心后，質(zhì)粒 DNA將在上清中，而基因組 DNA則與細(xì)胞碎片一起沉淀到離心管的底部。釋放出來(lái)的 DNA遇到強(qiáng)堿性（ NaOH）環(huán)境，就會(huì)變性。 一、實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)二 質(zhì)粒 DNA的分離、純化 質(zhì)粒 DNA－煮沸法 ? 煮沸法原理 ? 染色體 DNA比質(zhì)粒 DNA分子大得多，且染色體 DNA為線狀分子，而質(zhì)粒 DNA為共價(jià)閉合環(huán)狀分子； ? 當(dāng)加熱處理 DNA溶液時(shí)，線狀染色體 DNA容易發(fā)生變性，共價(jià)閉環(huán)的質(zhì)粒 DNA在冷卻時(shí)即恢復(fù)其天然構(gòu)象； ? 變性染色體 DNA片段與變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片結(jié)合形成沉淀，而復(fù)性的超螺旋質(zhì)粒 DNA分子則以溶解狀態(tài)存在液相中，從而可通過(guò)離心將兩者分開(kāi)。它是細(xì)菌內(nèi)的共生型遺傳因子。? 質(zhì)粒是染色體外的 DNA分子，大小可為 1kb到 200kb。
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