質(zhì)粒dna的分離、純化(已改無錯(cuò)字)
2023-06-22 23:02:07 本頁面
【正文】 壓力，否則菌體易污染，質(zhì)粒易丟失 ? 盡量選擇高拷貝的質(zhì)粒，如為低拷貝或大質(zhì)粒，則應(yīng)加大菌體用量 ? 菌株不要頻繁轉(zhuǎn)接（質(zhì)粒丟失） 四、注意事項(xiàng) —— 細(xì)胞裂解 ? 菌體量適當(dāng)。 ? 培養(yǎng)基去除干凈，同時(shí)保證菌體在懸浮液中充分懸浮。 ? 變性的時(shí)間不要過長（ 5分鐘），否則質(zhì)粒易被打斷。 ? 復(fù)性時(shí)間也不宜過長，否則會(huì)有基因組 DNA的污染。 ? G＋ 菌、酵母質(zhì)粒的提取，應(yīng)先用酶法或機(jī)械法處理，以破壁。 四、注意事項(xiàng) —— 核酸分離、純化 ? 采用吸附材料吸附的方式分離 DNA時(shí)，應(yīng)提供相應(yīng)的緩沖體系 ? 采用有機(jī)（酚 /氯仿）抽提時(shí)應(yīng)充分混勻，但動(dòng)作要輕柔 ? 離心分離兩相時(shí)，應(yīng)保證一定的轉(zhuǎn)速和時(shí)間 ? 針對不同材料的特點(diǎn)，在提取過程中輔以相應(yīng)的去雜質(zhì)的方法 四、注意事項(xiàng) —— 核酸沉淀、溶解 ? 當(dāng)沉淀時(shí)間有限時(shí)，用預(yù)冷的乙醇或異丙醇沉淀，沉淀會(huì)更充分 ? 沉淀時(shí)加入 1/10體積的 NaAc（ ， 3M），有利于充分沉淀 ? 沉淀后應(yīng)用 70％的乙醇洗滌，以除去鹽離子等 ? 晾干 DNA，讓乙醇充分揮發(fā)（不要過分干燥） ? 若長期儲(chǔ)存建議使用 TE緩沖液溶解 ? TE中的 EDTA能螯和 Mg2+或 Mn2+離子，抑制 DNase ? pH值為 ，可防止 DN
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