【文章內(nèi)容簡介】 心機和差速離心來說，離心時間是指顆粒從離心管樣品液的液面完全沉降到離心官底的時間，稱為沉降時間或澄清時間。 ? 對于密度梯度離心而言，離心時間是指形成界限分明的區(qū)帶時間，稱為區(qū)帶形成時間。 ? 等密度梯度離心，是指顆粒完全達到等密度點的平衡時間，稱為平衡時間。其中最常用的是沉降時間。 沉降時間 ? 沉降時間決定于顆粒的沉降速度和沉降距離。 ? t表示沉降時間（ s) 。s表示顆粒的沉降系數(shù) 。 w表示轉(zhuǎn)子的角速度（ r ad /s)。 r1,， r2分別表示旋轉(zhuǎn)軸中心到樣品液液面和離心管底的距離 (cm) ? 上式子做如下變換 k稱為轉(zhuǎn)子因子 )lnln r(1 2 12 w rSt ??Stw rrK ??? )lnln( 2 12溫度和 PH ? 離心溫度一般控制在 4℃ 左右，對于某些耐熱性較好的酶，也可以在室溫下進行離心分離。但在超速離心和高速離心時，由于轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)會發(fā)熱而引起溫度升高，必須采用冷凍裝置，使溫度維持在一定范圍內(nèi)。 ? 離心介質(zhì)的 PH必須處于酶穩(wěn)定的 PH范圍內(nèi)，必要時可采用緩沖溶液，過高過低可能引起酶的變性失活，還可能引起轉(zhuǎn)子和離心機其他部件的腐蝕，應當加以注意。 5 過濾和膜分離 ? 過濾是借助過濾介質(zhì)將不同大小，不同形狀的物質(zhì)分離的技術(shù)過程。 ? 過濾介質(zhì)不同分為膜過濾和非膜過濾兩大類。 ? 根據(jù)過濾介質(zhì)截留的物質(zhì)顆粒大小不同，過濾可分為粗濾，微濾，超濾和反滲透 過濾的分類及其特性 類別 截留顆粒的大小 截留的主要物質(zhì) 過濾介質(zhì) 粗濾 2181。m 酵母，霉菌，動植物 濾紙 濾布 纖維多孔陶瓷 細胞 固形物 燒結(jié)金屬 微濾 ~2181。m 細菌 灰塵等 微濾膜 微孔陶瓷等 超濾 20197。~ 病毒 生物大分子等 超濾膜 反滲透 20197。 生物小分子，鹽，離子 反滲透膜 非膜過濾 ? 定義：采用高分子膜以外的材料，如濾紙，濾布，多孔陶瓷，纖維，燒結(jié)金屬等作為過濾介質(zhì)的分離技術(shù)稱為非膜過濾，包括粗濾和部分微濾 ? 粗濾：借助于過濾介質(zhì)截留懸浮液中直徑大于 2181。m的顆粒，使固形物和液體分離的技術(shù)。 ? 粗濾應用范圍： 酵母 霉菌 動植物細胞 培養(yǎng)基殘渣 大 顆粒固形物 ? 粗濾介質(zhì) ： 濾紙 濾布 纖維 多孔陶瓷 燒結(jié)金屬 ? 助濾劑 ： 硅藻土 活性炭 紙粕 ? 推動力 ： 常壓過濾 加壓過濾 減壓過濾 粗濾 1 常壓過濾 以液位差為推動力的過濾方法 過濾設備簡單，操作易行方便，但過濾速度慢分離效果差 2 加壓過濾 以壓力泵或壓縮空氣產(chǎn)生的壓力為推動力的過濾方法。 設備簡單，過濾較快，過濾效果好 3 減壓過濾 又稱真空過濾或抽濾，是通過在過濾介質(zhì)的下方抽真空，增加過濾介質(zhì)上下方之間的壓力差，推動液體通過過濾介質(zhì)，而把大顆粒截留的過濾方法。 微濾 ? 定義：又稱微孔過濾。微濾所截留的顆粒直徑在~2181。m。無菌水，汽水等飲料的生產(chǎn)中廣泛應用。 ? 一般采用微孔陶瓷，燒結(jié)金屬等作為過濾介質(zhì)，也可用微濾膜。 膜分離技術(shù) ? 借助一定的孔徑的高分子薄膜，將不同大小不同形狀和不同特性的物質(zhì)顆?；蚍肿舆M行分離的技術(shù)稱為膜分離技術(shù)。 ? 常用膜 丙烯腈 醋酸纖維素 賽璐玢 尼龍 動物膜 硝酸纖維素膜 ? 實例：核糖體結(jié)合ＴＲＮＡ來確定遺傳密碼（硝酸纖維素的應用） ? 膜分離技術(shù)包括（薄膜的原理和推動力） 1加壓膜分離 2電場膜分離 3擴散膜分離 加壓膜分離 加壓膜分離 定義：以薄膜兩邊的流體靜壓差為推動力的膜分離 技術(shù)。 分類 (以截留顆粒大?。? 1微濾 2超濾 3反滲透 膜分離技術(shù) 1微濾 定義 :以微濾膜作為過濾介質(zhì)的膜分離 技術(shù)。 截留顆粒在 ~2181。m,操作壓力在 。例如：無菌水除菌，酶液除微生物細胞 2超濾 定義：借助于超濾膜將不同大小的物質(zhì)顆?；蚍肿臃蛛x的方法。 截留顆粒直徑在 20~2022197。，用于分離病毒和各種大分子。 操作壓力： ~ 壓力對超濾流率影響效果較復雜，視具體情況而定。 注意：超濾濃度不要太高。 超濾不僅用于酶的分離純化，還用于酶液的濃縮，特別適用于液體酶制劑的生產(chǎn)。 3反滲透 反滲透的孔徑小于 20197。，操作壓力在 ~13Mpa，分離各種離子和小分子物質(zhì)，在無離子水和海水淡化有廣泛的應用。 電場膜分離 ? 定義：電場膜分離是在半透膜兩側(cè)分別裝上正負極，在電場的作用下，帶電的小分子或者離子向與它們所帶電荷相反的方向移動，透過半透膜達到分離的目的。 ? 電滲析和擴散 膜分離 電滲析主要用于酶液或其他溶液的脫鹽，海水淡化，純水制備 以及其他帶電荷小分子的分離。用于凝膠電泳后含有的蛋白質(zhì)或核酸的凝膠帶電荷大分子的分離。 離子交換膜點滲析 與電滲析一樣，只是用離子交換膜代替半透膜。 擴散膜分離 ? 定義：利用小分子的擴散作用，不斷使小分子透過半透膜擴散到膜外，而大分子被截留，從而達到分離的效果。 ? 材料 動物膜 羊皮紙 火棉膠 賽璐玢 6 層析分離 ? 層析分離 定義：利用混合液中各組分的物化性質(zhì)（分子大小和形狀，分子極性，吸附力，分子親和力，分配系數(shù)等）的不同，使各組分以不同的比例分布在兩相中。其中一個相是固定相，另一個相是流動相。當流動相流經(jīng)固定相時，不同的組分在流動相中以不同的速度流動，從而達到不同組分的分離純化。 層析分離 吸附層析 分配層析 離子交換層析 層析聚焦 凝膠層析 親和層析 層析分離方法 層析方法 分離原理 吸附層析 利用吸附劑對不同的物質(zhì)吸附能力不同而使混合物各組分分離 分配層析 利用不同的物質(zhì)在兩相的分配系數(shù)不同而使各組分分離 離子交換層析 利用離子交換劑上的可解離集團（活性集團）對各種離子的親和力不同而達到分離目的 凝膠層析 以多孔凝膠為固定相，利用流動相中各組分的相對分子質(zhì)量不同而達到分離的目的 親和層析 利用生物分子與配基專一而又可逆的親和力力，使生物分子分離純化 層析聚焦 將酶等兩性物質(zhì)的等電點的特性與離子交換層