血清γ球蛋白的分離純化與鑒定(編輯修改稿)
2025-01-31 17:08 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 注意：★ 床面上要保持少許水， 防止膠床露出液面 。 ★ 膠面不平 ，用玻棒輕輕攪動(dòng)，讓凝膠自然沉降， 使表面平整。 ▲ 加樣與洗脫 ▲ 凝膠的再生 加樣： 用滴管將鹽析后樣品加入柱床面，打開(kāi)出口使樣品 溶液滲入凝膠。 洗脫： 加入洗脫液，打開(kāi)出口，保持流速 10滴 /min，收 集洗脫液，用鈉氏試劑檢測(cè)胺。 保存： 檢測(cè)洗脫液的蛋白質(zhì)量，保存含量高的進(jìn)一步純化 不斷加洗脫液，使銨全部流出，為下次實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。 注意事項(xiàng) ： 1 . 凝膠柱的制備質(zhì)量決定分離效果的好壞 。 2. 加樣分離時(shí)，滴速越慢，分離效果越好。 ★ 以管號(hào)為橫軸，蛋白質(zhì)含量為縱軸繪制洗脫曲線，分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 三、 DEAE－纖維素離子交換層析 【 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?】 1. 通過(guò)使用 DEAE－纖維素離子交換層析法 ， 進(jìn)一步 純化 γ球蛋白脫鹽液 ， 得到較純的 γ球蛋白溶液 2. 學(xué)習(xí)了解 離子交換層析方法的基本原理和應(yīng)用范圍 離子交換層析的基本原理 離子交換層析是一種常用的、通過(guò)使用各種類型的離子交換劑達(dá)到分離純化目的的層析方法。離子交換劑是通過(guò)化學(xué)反應(yīng)將帶電基團(tuán)引入到惰性支持物上形成的固體物質(zhì)，在實(shí)驗(yàn)中作為固定相。如果其帶負(fù)電，則能結(jié)合陽(yáng)離子，成為陽(yáng)離子交換劑；如果其帶正電，則能結(jié)合陰離子，稱為 陰離子交換劑 。可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，選擇不同的離子交換劑進(jìn)行離子交換層析。 DEAE （二乙基氨基乙基） －纖維素 含有可離子化的堿基，可與氫離子結(jié)合，成為帶正電荷的陰離子交換劑。 離子交換層析的基本原理 靠靜電引力結(jié)合在交換劑上的離子，叫做平衡離子 應(yīng)用離子交換層析時(shí)要找到適當(dāng)?shù)臈l件，使一些化合物帶電結(jié)合到交換劑上，而使另一些化合物不結(jié)合到交換劑上。在本實(shí)驗(yàn)條件下， DEAE－纖維素是具有帶多個(gè)正電荷游離堿基的聚合物，所以主要靠靜電吸引與帶負(fù)電的蛋白質(zhì)形成離子鍵，對(duì)蛋白質(zhì)提純有很大好處 蛋白質(zhì)的電離示意圖 DEAE－纖維素離子交換層析純化 γ－球蛋白 血清 α、 β、 γ－球蛋白 、 清蛋白的等電點(diǎn)為：
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1