血清γ球蛋白的分離純化與鑒定(編輯修改稿)
2025-01-31 17:08 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 注意：★ 床面上要保持少許水， 防止膠床露出液面 。 ★ 膠面不平 ，用玻棒輕輕攪動，讓凝膠自然沉降， 使表面平整。 ▲ 加樣與洗脫 ▲ 凝膠的再生 加樣： 用滴管將鹽析后樣品加入柱床面，打開出口使樣品 溶液滲入凝膠。 洗脫： 加入洗脫液，打開出口，保持流速 10滴 /min，收 集洗脫液，用鈉氏試劑檢測胺。 保存： 檢測洗脫液的蛋白質(zhì)量，保存含量高的進一步純化 不斷加洗脫液，使銨全部流出，為下次實驗做準備。 注意事項 ： 1 . 凝膠柱的制備質(zhì)量決定分離效果的好壞 。 2. 加樣分離時，滴速越慢，分離效果越好。 ★ 以管號為橫軸，蛋白質(zhì)含量為縱軸繪制洗脫曲線，分析實驗結(jié)果。 三、 DEAE－纖維素離子交換層析 【 實驗目的 】 1. 通過使用 DEAE－纖維素離子交換層析法 ， 進一步 純化 γ球蛋白脫鹽液 ， 得到較純的 γ球蛋白溶液 2. 學習了解 離子交換層析方法的基本原理和應用范圍 離子交換層析的基本原理 離子交換層析是一種常用的、通過使用各種類型的離子交換劑達到分離純化目的的層析方法。離子交換劑是通過化學反應將帶電基團引入到惰性支持物上形成的固體物質(zhì)，在實驗中作為固定相。如果其帶負電，則能結(jié)合陽離子，成為陽離子交換劑；如果其帶正電，則能結(jié)合陰離子，稱為 陰離子交換劑 ?？筛鶕?jù)實驗需要，選擇不同的離子交換劑進行離子交換層析。 DEAE （二乙基氨基乙基） －纖維素 含有可離子化的堿基，可與氫離子結(jié)合，成為帶正電荷的陰離子交換劑。 離子交換層析的基本原理 靠靜電引力結(jié)合在交換劑上的離子，叫做平衡離子 應用離子交換層析時要找到適當?shù)臈l件，使一些化合物帶電結(jié)合到交換劑上，而使另一些化合物不結(jié)合到交換劑上。在本實驗條件下， DEAE－纖維素是具有帶多個正電荷游離堿基的聚合物，所以主要靠靜電吸引與帶負電的蛋白質(zhì)形成離子鍵，對蛋白質(zhì)提純有很大好處 蛋白質(zhì)的電離示意圖 DEAE－纖維素離子交換層析純化 γ－球蛋白 血清 α、 β、 γ－球蛋白 、 清蛋白的等電點為：
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