蛋白質(zhì)的分離、純化和表征(1)(編輯修改稿)
2025-05-27 06:38 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 透膜為玻璃紙或纖維素材料 血液透析 小分子溶出 小分子被帶出 透析機(jī) 透析液 加壓 血液 凝膠過濾 凝膠過濾所用介質(zhì)為凝膠珠，其內(nèi)部為多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)一定型號的凝膠網(wǎng)孔大小一定，只允許相應(yīng)大小的分子進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，大分子則被排阻在外 洗脫時(shí)大分子隨洗脫液從顆粒間隙流下來，洗脫液體積?。恍》肿釉陬w粒網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中穿來穿去，歷程長，后洗脫下來，洗脫體積大 . 測定蛋白質(zhì)分子量一般用葡聚糖，商品名： Sephadex （二）利用溶解度差別的純化方法 調(diào)整溶液 pH 不同蛋白在各自 pI處依次沉淀 2. 鹽析 在蛋白質(zhì)的水溶液中，加入大量 高濃度的強(qiáng)電解質(zhì)鹽 如硫酸銨、氯化鈉、硫酸鈉等，可破壞蛋質(zhì)分子表面的水化層，中和它們的電荷，因而使蛋白質(zhì)沉淀析出，這種現(xiàn)象稱為 鹽析 。 而低濃度的鹽溶液加入蛋白質(zhì)溶液中，會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)的溶解度增加，該現(xiàn)象稱為鹽溶 。 鹽析的機(jī)理 ： 破壞蛋白質(zhì)的水化膜，中和表面的凈電荷 。 鹽析法是最常用的蛋白質(zhì)沉淀方法，該方法不會(huì)使蛋白質(zhì)產(chǎn)生變性 。 ?降低介電常數(shù) ?爭奪水化膜 電泳原理 ? 蛋白質(zhì)在非等電點(diǎn)時(shí)所帶總電荷不為 0 ? 分子大小不同，電場中移動(dòng)速度也不同 蛋白質(zhì)與多肽一樣，能夠發(fā)生兩性離解，也有等電點(diǎn)。在等電點(diǎn)時(shí) (Isoelectric point pI)，蛋白質(zhì)的溶解度最小，在電場中不移動(dòng)。 在不同的 pH環(huán)境下，蛋白質(zhì)的電學(xué)性質(zhì)不同。在等電點(diǎn)偏酸性溶液中，蛋白質(zhì)粒子帶負(fù)電荷，在電場中向正極移動(dòng)；在等電點(diǎn)偏堿性溶液中，蛋白質(zhì)粒子帶正電荷，在電場中向負(fù)極移動(dòng)。這種現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)電泳 (Electrophoresis)。 電泳遷移率 (泳動(dòng)度 ) 電場力 F = q E = q
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