蛋白質(zhì)的提取純化和素材(編輯修改稿)
2024-11-04 05:31 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 二十八頁。,其他(q237。tā)方法,,鹽析(y225。n xī)法,等電點法,有機溶劑法,第十一頁，共二十八頁。,蛋白質(zhì)的精純和分析(fēnxī)鑒定,第十二頁，共二十八頁。,親和色譜(s232。 pǔ),配體,蛋白質(zhì),蛋白質(zhì)和配體復合物,洗脫(xǐ tuō),結合(ji233。h233。),耦聯(lián),作用機理,第十三頁，共二十八頁。,金屬(jīnshǔ)螯合親和層析,鈣調(diào)蛋白的外形似啞鈴,有兩個球形的末端,中間被一個長而富有彈性的螺旋結構相連,每個末端有兩個Ca2+ 結構域,每個結構域可以結合一Ca2+ , 這樣,一個鈣調(diào)蛋白可以結合4個Ca2+ ,鈣調(diào)蛋白與Ca2+ 結合后的構型相當穩(wěn)定 。,第十四頁，共二十八頁。,金屬(jīnshǔ)螯合色譜,原理：利用固定相載體上偶聯(lián)的亞胺基乙二酸為配基 與二價金屬離子發(fā)生螯合作用，結合在固定相 上，二價金屬離子可以與流動相中含有(h225。n yǒu)的半胱 氨酸、組氨酸、咪唑及其類似物發(fā)生特異螯合 作用而進行別離,第十五頁，共二十八頁。,步驟(b249。zh242。u),1.制作金屬螯合親和色譜柱：用濃度為0.2 mol/L的CaCl2溶液上柱。將上清液PH調(diào)制68，參加蛋白質(zhì)解離抑制劑。慢上樣 3.再用配體CaCl2溶液洗脫，下方流出為目的蛋白液，用大使管或者燒杯(shāobēi)盛裝之。,2.上柱后依次用50ml bufferB、200ml含0.5mol/L N
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