蛋白質化學-蛋白質的共價結構(編輯修改稿)
2025-02-03 07:55 本頁面
【文章內容簡介】 S：環(huán)十肽，含有 D苯丙氨酸、鳥氨酸，對革蘭氏陰性細菌有破壞作用，主要作用于細胞膜。 ：含有 D— 半胱氨酸和 D— 纈氨酸的二肽衍生物 。主要破壞細菌的細胞壁粘肽的合成引起溶菌。 ：均為九肽 ：促進血管舒張，促進水、鈉離子的排出。 ：為五肽，具有鎮(zhèn)痛作用。 （ mushrooms）產生的毒素 鵝膏蕈堿 腦啡與其受體結合后可以產生鎮(zhèn)痛效果 麻啡可以模擬腦啡的作用，因此有類似的效用 鵝膏蕈堿 鬼筆鵝膏，又名毒鵝膏菌，此菌極毒，目前尚無有效解毒辦法， 鵝膏蕈堿 （鵝膏毒肽）是鵝膏蕈所含的最重要致死毒素，為雙環(huán)八肽，食入后，可迅速被消化道吸收進入肝臟，并能迅速與肝細胞 RNA聚合酶結合，抑制 mRNA的生成，造成肝細胞壞死，導致急性肝功能衰竭為主的多器官衰竭。 圖 46 α 鵝膏蕈堿的化學結構 三、蛋白質一級結構的測定 （一）蛋白質一級結構的定義 （二） N末端分析 （三） C末端分析 （四） 二硫鍵的拆開和肽鏈的分離 （五） 肽鏈的完全水解和氨基酸組成的測定 （六） 肽鏈的部分水解和肽段的分離 （七） 多肽鏈中氨基酸順序的測定 （八） 二硫鍵位置的確定 （一）蛋白質一級結構的定義 蛋白質的一級結構 是指肽鏈的氨基酸組成及其排列順序和二硫鍵的位置。 氨基酸序列是蛋白質分子結構的基礎，它決定蛋白質的高級結構。一級結構可用氨基酸的三字母符號或單字母符號表示，從 N末端向 C末端書寫。采用三字母符號時，氨基酸之間用連字符“ － ” 隔開。 （二）測定步驟 測定蛋白質的一級結構，要求樣品必須是均一的（純度大于 97％）而且是已知分子量的蛋白質。一般的測定步驟是： 通過末端分析確定蛋白質分子由幾條肽鏈構成 將每條肽鏈分開，并分離提純。 肽鏈的一部分樣品進行完全水解，測定其氨基酸組成和比例。 肽鏈的另一部分樣品進行 N末端和 C末端的鑒定。 拆開肽鏈內部的二硫鍵。 一部分肽鏈用部分水解方法降解成一套大小不等的肽段，并將各個肽段分離出來。測定每個肽段的氨基酸順序。 另一部分肽鏈樣品再用另一種部分水解方法水解成另一套肽段，其斷裂點與第一種方法不同。分離肽段并測序。比較兩套肽段的氨基酸順序，根據其重疊部分拼湊出整個肽鏈的氨基酸順序。 測定原來的多肽鏈中二硫鍵和酰胺基的位置。 N末端分析 （ 1） 蛋白質的末端氨基與 2,4二硝基氟苯 (DNFB) （ Sanger試劑）在弱堿性溶液中作用生成二硝基苯基蛋白質（ DNP蛋白質），產物黃色，可經受酸性 100℃ 高溫。水解時，肽鏈斷開， DNP氨基酸 能溶于有機溶劑（如乙醚）中，這樣可與其他氨基酸和 ε DNP賴氨酸分開。 經雙向濾紙層析或柱層析，可以鑒定黃色的 DNP氨基酸。 N末端分析 （ 2） 蛋白質的末端氨基與丹磺酰氯 (DNSCl)反應，生成 DNS蛋白質。 DNS氨基酸有強熒光，激發(fā)波長在 360nm左右， 比 DNFB法靈敏 100倍 。 肽水解后的 DNS氨基酸不需要提取。 N末端分析 （ 3）末端氨基與 異硫氰酸苯酯（ PITC） 在弱堿性條件下形成相應的苯氨基硫甲酰衍生物，后者在硝基甲烷中與酸作用發(fā)生環(huán)化，生成相應的苯乙內酰硫脲衍生物而從肽鏈上掉下來。產物可用氣 液色譜法進行鑒定。 Edman法 此法是目前應用最廣泛方法。 優(yōu)點 是剩下的肽鏈仍是完整的，可依照此法重復測定新生的 N末端氨基酸?，F在已經有全自動的氨基酸順序分析儀，可測定含 20個以上氨基酸的肽段的氨基酸順序。 缺點 是不如丹磺酰氯靈敏，可與之結合使用。 （ 4） N末端氨基酸也可用酶學方法即 氨肽酶 法測定。 N末端分析 常見問題及處理方法： 經常碰到 N末端殘基的氨基被封閉。因此不能與 Edman降解試劑發(fā)生作用。 焦谷氨?；⒁阴；约澳承┉h(huán)狀肽。 C末端分析 （ 1） C末端氨基酸可用硼氫化鋰 還原生成相應的 α氨基醇。肽鏈水解后，再用層析法鑒定。有斷裂干擾。 （ 2）多肽與肼在無水條件下加熱 ，可以斷裂所有的肽鍵，除 C末端氨基酸外，其他氨基酸都轉變?yōu)橄鄳孽ｋ禄衔?。肼解下來?C末端氨基酸可用紙層
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