實(shí)驗(yàn)八親和層析分離純化蛋白質(zhì)(14)(編輯修改稿)
2025-02-14 19:31 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 PBS緩沖液洗柱子，重復(fù) 3遍。 4．加入 1ml 洗脫液。 5．用離心管收集洗脫液，每管收集 。 6． PBS 緩沖液洗柱子 3遍，關(guān)閉出口。 7．用分光光度計(jì)測定每一管的吸光度值， 記錄讀數(shù)，繪制洗脫曲線。 8．將讀數(shù)最大的一管用于 SDSPAGE分析。 第二部分 SDSPAGE檢測目標(biāo)蛋白 一、實(shí)驗(yàn)原理 ? 蛋白質(zhì)與 SDS按 1： ，消除了蛋白質(zhì)間原有的電荷差異。 ? 蛋白質(zhì)的遷移速度只取決于分子大小。在15200 KD之間，遷移率和分子量的對數(shù)呈線性關(guān)系： log MW = K bm 濃縮膠 ? 濃縮膠 ， Gly ，三類離子在電場中的遷移速度： Cl蛋白質(zhì) Gly。 ? 電泳時， Cl快， Gly慢，在快慢離子間形成了一個低離子濃度的高壓區(qū)，區(qū)內(nèi)的蛋白質(zhì)加速移動。 ? 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)移到 Cl區(qū)時，高電壓消失，蛋白質(zhì)的移動速度減慢，在快慢離子間被濃縮。 二、實(shí)驗(yàn)步驟 1．洗凈玻璃板，用蒸餾水沖洗干凈后吹干，安裝制膠器。 2．根據(jù)下列配方制作 12%分離膠。 12%分離膠 試劑名稱 12%分離膠 蒸餾水 ml 3
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