蛋白質(zhì)聚焦層析(編輯修改稿)
2025-09-12 00:21 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 地遷移到與它等電點相同的 pH處 ? 從此位置開始，其蛋白質(zhì)將以緩慢的速度進(jìn)行吸附、解吸附，直到在等電點 pH時被洗出 聚焦效應(yīng) ? 若在此蛋白質(zhì)樣品被洗出前，再加人第二份同種 蛋白質(zhì)樣品時，后者將在洗脫液的作用下以 同樣的速度 向前移動，而 不被固定相吸附 ，直到其遷移至近似本身等電點的環(huán)境處（即第一個樣品的緩慢遷移處） ? 然后兩份樣品以同樣的速度遷移，最后 同時從柱底洗出 聚焦層析的介質(zhì) ? 大多數(shù)都是以 交聯(lián)的瓊脂糖凝膠 為載體 ， 通過 共價鍵結(jié)合 將 多氨基多羧基化合物 偶聯(lián)到瓊脂糖凝膠載體上 ? 目前用的較多的層析介質(zhì)是多聚緩沖液交換劑 （ 固定相 ） PBE118， PBE94， 前者屬于偏堿性層析介質(zhì) （ pH 811） ， 后者屬于中性層析介質(zhì) （ pH49） ? 常用多緩沖劑 （ 流動相 ） 有 Polybuffer96和Polybuffer74（ 分別在 pH69和 pH74范圍內(nèi)有較強緩沖能力 ? 如將他們混合在一起 ， 則較強緩沖能力的 pH范圍為 49 緩沖液和交換樹脂的選擇 ? 緩沖液和多緩沖液交換樹脂每次最大操作范圍是 3pH單位 ? 若是樣品的 pl是已知的，只要選擇對應(yīng)的 pH緩沖液和樹脂即可，最好洗脫位置在 pH梯度的 1/31/2以后 ? 若是未知樣品，應(yīng)先定出 pl值。也可用公司配套提供的聚焦層析試劑箱測定 pI ? 一旦決定了 pl，就可選擇了 緩沖液和交換樹脂的選擇 ? 交換樹脂量的選擇是取決于樣品數(shù)量，樣品性質(zhì)和雜質(zhì)多少等，一般 20~30毫升床體積可分離 1200毫克蛋白 /pH單位 操作 ? 先將懸浮的多緩沖液交換樹脂裝柱。要求無氣泡 (可先脫氣 ) ? 用一個 高于多緩沖液 pH的起始緩沖液平衡柱子。當(dāng)流出液 pH與起始緩沖液 pH相同即可上樣 ? 樣品溶在所選擇的多緩沖液中，再用同樣的多緩沖液洗脫。這祥各種蛋白 在自己的 pl處聚焦 ，并依次洗脫下來，分部收集 操作 ? 操作流程： ? 聚焦層析柱
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