蛋白質(zhì)分子設(shè)計(jì)(編輯修改稿)
2025-02-13 03:43 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 Phe或 Tyr 把 Cys轉(zhuǎn)換為 Ala或 Ser，把 Met轉(zhuǎn)換為 Gln、Val、 Ile或 Leu替代表面羧基 替換表面荷電基團(tuán) His、 Cys以及 Tyr的置換，內(nèi)離子對的置換 專一性的改變，增加逆轉(zhuǎn)數(shù) (turnover number)，改變酸堿度 蛋白質(zhì)突變體設(shè)計(jì)步驟 1）以蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)，利用計(jì)算機(jī)模擬技術(shù)確定突變位點(diǎn)及替換的氨基酸 2）利用能量優(yōu)化及蛋白質(zhì)動(dòng)力學(xué)方法預(yù)測修飾后的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu) 3）預(yù)測的結(jié)構(gòu)與原始的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)比較，利用蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu) 功能或功能 穩(wěn)定性相關(guān)知識及理論計(jì)算預(yù)測新蛋白質(zhì)可能具有的性質(zhì) 注意問題 A 應(yīng)確定蛋白質(zhì)折疊敏感的區(qū)域， 包括帶有特殊扭角的氨基酸、鹽橋、密堆積區(qū)等 B 應(yīng)確定對功能非常重要的位置 C 考察剩余位置對所希望改變的影響 D 當(dāng)進(jìn)行互換或插入 /刪除殘基是應(yīng)考慮他們對結(jié)構(gòu)特征的影響， 如疏水堆積、側(cè)鏈取向、氫鍵、鹽橋等 三、蛋白質(zhì)設(shè)計(jì)中的結(jié)構(gòu)－功能關(guān)系研究 ? 定位突變在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系研究中的作用 ? 突變蛋白質(zhì)構(gòu)象的探測 定位突變種類 ? 插入一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基 ? 刪除一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基 ? 替換或取代一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基 ? 最大量的定位突變是在體外利用重 組 DNA技術(shù)或 PCR方法 突變蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的評估 ? 溶解性 ? 熱力學(xué)分析 ? Ｘ射線晶體學(xué)及ＮＭＲ譜 ? 園二色散方法 ? 單克隆抗體探測構(gòu)象變化 蛋白質(zhì)中功能殘基的鑒定 1．根據(jù)已知結(jié)構(gòu)信息確定功能殘基 2．突變實(shí)驗(yàn)方法鑒定功能殘基 隨機(jī)突變和刪除分析及連接片斷掃描突變 3．利用蛋白質(zhì)同源性鑒定功能殘基 天然蛋白質(zhì)的剪裁 ? 分子剪裁：指在對天然蛋白質(zhì)的改造中替換 1個(gè)肽段或 1個(gè)結(jié)構(gòu)域 ? 應(yīng)用：抗體分子的改造； Rop 結(jié)構(gòu)與功能的容忍度 ? 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)及功能對殘基的替換有一定的容忍度，即結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系有一定的穩(wěn)健度 ? Fersht等替換了 Barnase的所有內(nèi)核殘基。結(jié)果表明 23％的突變體保留了酶的活性 ? Mathews及其合作者在溶菌酶內(nèi)核中替換多至 10個(gè)殘基。實(shí)驗(yàn)證明多重取代的蛋白仍具有活性以及協(xié)
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