蛋白質分子設計(編輯修改稿)
2025-02-13 03:43 本頁面
【文章內容簡介】 Phe或 Tyr 把 Cys轉換為 Ala或 Ser，把 Met轉換為 Gln、Val、 Ile或 Leu替代表面羧基 替換表面荷電基團 His、 Cys以及 Tyr的置換，內離子對的置換 專一性的改變，增加逆轉數(shù) (turnover number)，改變酸堿度 蛋白質突變體設計步驟 1）以蛋白質的三維結構為基礎，利用計算機模擬技術確定突變位點及替換的氨基酸 2）利用能量優(yōu)化及蛋白質動力學方法預測修飾后的蛋白質結構 3）預測的結構與原始的蛋白質結構比較，利用蛋白質結構 功能或功能 穩(wěn)定性相關知識及理論計算預測新蛋白質可能具有的性質 注意問題 A 應確定蛋白質折疊敏感的區(qū)域， 包括帶有特殊扭角的氨基酸、鹽橋、密堆積區(qū)等 B 應確定對功能非常重要的位置 C 考察剩余位置對所希望改變的影響 D 當進行互換或插入 /刪除殘基是應考慮他們對結構特征的影響， 如疏水堆積、側鏈取向、氫鍵、鹽橋等 三、蛋白質設計中的結構－功能關系研究 ? 定位突變在蛋白質結構與功能關系研究中的作用 ? 突變蛋白質構象的探測 定位突變種類 ? 插入一個或多個氨基酸殘基 ? 刪除一個或多個氨基酸殘基 ? 替換或取代一個或多個氨基酸殘基 ? 最大量的定位突變是在體外利用重 組 DNA技術或 PCR方法 突變蛋白質結構的評估 ? 溶解性 ? 熱力學分析 ? Ｘ射線晶體學及ＮＭＲ譜 ? 園二色散方法 ? 單克隆抗體探測構象變化 蛋白質中功能殘基的鑒定 1．根據(jù)已知結構信息確定功能殘基 2．突變實驗方法鑒定功能殘基 隨機突變和刪除分析及連接片斷掃描突變 3．利用蛋白質同源性鑒定功能殘基 天然蛋白質的剪裁 ? 分子剪裁：指在對天然蛋白質的改造中替換 1個肽段或 1個結構域 ? 應用：抗體分子的改造； Rop 結構與功能的容忍度 ? 蛋白質結構及功能對殘基的替換有一定的容忍度，即結構與功能關系有一定的穩(wěn)健度 ? Fersht等替換了 Barnase的所有內核殘基。結果表明 23％的突變體保留了酶的活性 ? Mathews及其合作者在溶菌酶內核中替換多至 10個殘基。實驗證明多重取代的蛋白仍具有活性以及協(xié)
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