葡聚糖凝膠測(cè)蛋白質(zhì)分子量(編輯修改稿)
2024-10-31 05:37 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 +Vi，例如一些芳香族化合物的洗脫體積遠(yuǎn)超出理論計(jì)算的最大值。 不同大小分子量的蛋白質(zhì)，進(jìn)入凝膠篩孔的程度不同，其洗脫體積決定于分子大小，蛋白質(zhì)在葡聚糖凝膠柱上層析的洗脫體積和分子量的對(duì)數(shù)呈直線關(guān)系。假設(shè)用分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)在一定型號(hào)葡聚糖凝膠柱上層析，精確測(cè)其洗脫體積，并以洗脫體積Ve對(duì)分子量的對(duì)數(shù)logMW作圖，可獲得一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。未知分子量的蛋白質(zhì)在相同條件下層析，根據(jù)其洗脫體積即可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得分子量。,第六頁(yè)，共十頁(yè)。,試劑和材料 洗脫液：0.05M TrisHCl緩沖液〔pH7.5〕，0.1M KCl溶液：稱取12.12g Tris，15g KCl，先用少量去離子水溶解，再參加6.67mL濃HCl，用去離子水定容至2L。 藍(lán)色葡聚糖2000(10mg/ml)；Sephsdex G100；牛血清白蛋白〔2mg/ml)〔Mr 67 000)。細(xì)胞色素c〔Mr 12 800〕 器材 層析柱 蠕動(dòng)泵 核酸蛋白檢測(cè)儀 自動(dòng)局部收集器 記錄儀 實(shí)驗(yàn)步驟： 一、溶脹凝膠 取Sephadex G100 3g，加200mL蒸餾水，沸水浴中溶脹5小時(shí)。待溶脹平衡后，傾去上層清液，包括細(xì)顆粒，然后再放些蒸餾水?dāng)噥y，靜置使凝膠下沉，再傾去上層清液，至無(wú)細(xì)顆粒為止。溶脹
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