實驗三蛋白質的鹽析分離和凝膠層析(編輯修改稿)
2025-06-20 01:47 本頁面
【文章內容簡介】 含量測定（ fonlin酚法、考馬斯亮藍 G250法） 蛋白質的分級分離（粗分級） 一、鹽析沉淀分離 鹽溶和鹽析現(xiàn)象：低鹽濃度下蛋白質的溶解度隨鹽濃度的增加而增加；鹽濃度升高到一定程度后，蛋白質的溶解度隨鹽濃度的增加而減小析出。 鹽的選擇：通常采用中性鹽，硫酸銨、硫酸鎂、氯化鈉、磷酸鈉等。 硫酸銨濃度的計算與調整： （ 1）加硫酸銨飽和液： V=V0（ S2— S1） /（ 1— S2）； （ 2）加固體硫酸銨： t=G（ S2— S1） /（ 1— AS2） V為所加飽和硫酸銨體積； V0 為原溶液體積； S2 為需達到的硫酸銨飽和度； S1 為原溶液硫酸銨飽和度； G和 A為常數(shù)， 0 ? 時 G為 507， A為 ； 20 ? 時， G為 533， A為 。 t為每升加入的克數(shù)。 二、有機溶劑沉淀分離 有機溶劑沉淀出的蛋白質沉淀比鹽析沉淀出的蛋白質沉淀易于過濾或離心分離，分辨率好，但容易使蛋白質變性，通常在低溫下進行。 三、選擇性沉淀法（等電點、熱變性、酸堿變性等） 四、吸附法 五、重金屬鹽沉淀法 蛋白質的進一步純化（細分級） ? 一、透析和超過濾 ? 二、層析（色譜）分離 ? 氣相色譜（色譜儀） ? 液相色譜：紙層析和薄層層析（分配層析）、柱層析（分子排阻、離子交換、親和層析、吸附層析等） ? 高效液相色譜（色譜儀） ? 兩位英國科學家 Martin和 Synge發(fā)明了分配色譜（層析），他們獲得了 1952年的諾貝爾化學獎。 一些常用的蛋白質純化中的儀器 機械細胞破碎儀 超聲波細胞破碎儀 ? 色譜工作站 WI
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