實(shí)驗(yàn)三葡聚糖凝膠柱層析純化蛋白質(zhì)(編輯修改稿)
2025-06-20 01:47 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ③ 0＜ Kd1,則 Ve=Vo+Kd Vi ， 部分摻入 ； ④ Kd1，則 VeVo+Vi ，如某些芳香族化 合物（ Phe,Tyr,Trp等）， Sephadex G25對(duì)它們 有吸附作用 。 、影響凝膠層析分離的因素： 、樣品的體積、粘度； 、層析柱 ； 、洗脫液流速的影響 ； 、洗脫液離子強(qiáng)度、 PH的影響。 、樣品的體積、粘度： 分析分離時(shí) ， Vsample=14%Vbed； 制備分離時(shí) ， Vsample=1030Vbed. 相對(duì)粘度 樣品液粘度與洗脫液粘度的比值 。分離效果只與相對(duì)粘度有關(guān) ， 一般來說 ，相對(duì)粘度不得超過 ― 2。 今天的上樣量 （ ） 約為 1%柱床體積 。 、層析柱： ①柱長： 組別分離 時(shí)， 20－ 30厘米； 分級(jí)分離 時(shí)，可長至 100厘米； ②柱徑： 柱長與柱徑的比為 5:1─10:1(脫鹽 )， 20:1─100:1 (純化 ) 。 今天選用的是 1cm 30cm的層析柱。 、洗脫液流速的影響： 洗脫液的流速與樣品分離的分辨率相關(guān)。流速過快，會(huì)使色譜峰變形， 流速過慢，樣品擴(kuò)散傾向加劇。 一般流速控制在 30－ 200ml/h。 今天洗脫流速控制在 1ml/min。 、 洗脫液的離子強(qiáng)度和 pH值的影響： 純化蛋白時(shí) ,通常選用離子強(qiáng)
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