蛋白質(zhì)的通性、純化與表征(編輯修改稿)
2025-05-28 18:07 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 子（無機(jī)鹽）和水通過，以達(dá)到除去蛋白質(zhì)溶液中小分子（鹽、低分子酸，單糖等）。 超濾：施以一定的壓力使小分子溶質(zhì)通過一半透膜，而按半透膜的篩孔大小截留相應(yīng)的蛋白質(zhì)分子。 1）透析和超濾 2）凝膠過濾層析（ GFC） VtVo 或 Vi+Vm Vt Vo ?分離介質(zhì) :凝膠顆粒（交聯(lián)葡聚糖、聚丙烯酰胺、瓊脂糖等），具有不均勻的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) ?分離機(jī)制： 分子篩效應(yīng)，即 根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同來分離蛋白質(zhì)， 大分子物質(zhì)最先流出柱外，小分子物質(zhì)最后流出柱外 。 分配系數(shù) Kd 可以把凝膠層析看成是 液 液分配層析 。固定相是凝膠珠內(nèi)部水相（ Vi），流動(dòng)相是凝膠外部水相（ Vo）。 Kd為樣品在兩相間的分配系數(shù)，也可以說 Kd是分子量不同的溶質(zhì)在凝膠內(nèi)部水和外部水中的分配系數(shù)，它只與被分離物分子的大小和凝膠顆?？紫兜拇笮》植加嘘P(guān)，而與柱的粗細(xì)長(zhǎng)短無關(guān)，也就是說它對(duì)特定物質(zhì)為常數(shù)，與柱的物理?xiàng)l件無關(guān)。 Kd = (VeVo)/Vi 在限定的層析條件下， Vt和 Vo都為恒定值， Ve值是隨著分離物分子質(zhì)量的變化而變化的。分離物分子質(zhì)量大， Kd值??；反之， Kd值增大。 (3)當(dāng) 0Kd1時(shí)，內(nèi)水體積只有一部分可被組分利用，能部分的擴(kuò)散滲入內(nèi)水中， Ve在 Vo與 Vo+Vi之間變化，即 Ve=Vo+KdVi (Ⅱ )。 (4)有時(shí) Kd1，表示凝膠對(duì)分子有吸附作用，此時(shí) VeVo+Vi，例如一些芳香族化合物苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸在 Sephadex G25中的 Kd值分別為 ， 。 (1)當(dāng) Kd = 0時(shí)，分子根本不能進(jìn)入凝膠內(nèi)部 (全排阻 )，洗脫體積等于空隙容積，即 Ve = Vo (I)。 (2)當(dāng) Kd = 1時(shí)，分子可完全滲入凝膠內(nèi)部時(shí)，洗脫體積應(yīng)為外水體積與內(nèi)水體積之和，即 Ve=Vo+Vi (Ⅲ )。 Kd可以有下列幾種情況 分子量大洗脫體積小，分子量小洗脫體積大 ?常用于： 分離純化 蛋白質(zhì) (包括酶類 )、 核酸 、 多糖 、 激素 、 氨基酸和抗生素等物； ?還可用
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