基因表達(dá)與蛋白質(zhì)純化技術(shù)探討(編輯修改稿)
2025-03-31 20:47 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 HSVtag (QPELAPEDPED) ? Stag (KETAAKFERQHMDS) ? VSVGtag (TTDIEMNRLGK) ? HAtag (YPYDVPDYA) ? Flagtag (DYKDDDDK) ? Myctag (EQKLISEEDL) 各種用于抗體識(shí)別的標(biāo)記 ? Biotinylationtag 100多 AA的結(jié)構(gòu)域 , 在大腸桿菌中被識(shí)別為生物素化的位點(diǎn) . Promega的 PinPointTM Xa1。 Invitrogen的 pET104DEST. ? 未命名 DVEAWLGAR, 被用來(lái)和 streptoavidin結(jié)合 (個(gè)人通訊 ) ? 未命名 一些病毒外殼蛋白的片段 , 破壞細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)導(dǎo)致容易進(jìn)入細(xì)胞 有前景的特殊用途的 tag ? DTT: intein的 ↓ Cys ? 溴化氰 : Met↓ ? Thrombin: LVPR↓ GS ? Factor Xa: IEGR↓ ? Enterokinase: DDDDK↓ ? PreScissionTM protease: LEVLFQ↓ GP ? Genenase I TM PGAAHY↓ ? TEV protease: ENLYFQ ↓ G 融合蛋白的專一性切割 ? BL21(DE3)/pLysS : 自身表達(dá) T7 RNA polymerase 適用 pET系列等帶 T7啟動(dòng)子的載體 ? M15/SG13009 : 自身表達(dá) T5 RNA polymerase 適用 pQE系列等帶 T5啟動(dòng)子的載體 ? BL21TrxB(DE3) : thioredoxin reductase 突變 ? Origami : thioredoxin reductase/glutathione reductase 雙突變 適合帶 thioredoxin reductase的融合表達(dá)載體 , 幫助形成更多的二硫鍵 ? BR21CodonPlusRIL: 富含 AT的真核生物基因的表達(dá) ? BR21CodonPlusRP: 富含 GC的真核生物基因的表達(dá) 特殊的表達(dá)用菌株 ? Novagen ? Stratagene ? Invitrogen ? BioLabs ? Qiagen ? Pharmacia ? Promega ? Clontech ? Roche ? Gibco/BRL 重要的原核表達(dá)質(zhì)粒提供商 ?如果所表達(dá)的蛋白質(zhì)有二硫鍵并需要正確的立體結(jié)構(gòu) , 盡可能進(jìn)行可溶性表達(dá) 。 ?如果所表達(dá)的蛋白質(zhì)沒(méi)有二硫鍵或只用來(lái)制備抗血清 , 采用包含體表達(dá)比較好 。 ?如果希望表達(dá)的多肽的分子量小于 10 kDa, 一定要進(jìn)行融合表達(dá) ? 采用 MBD融合 ? 采用 GST融合 ? 采用 CBD融合 ? 采用 thioredoxin融合 ? 采用 Origami等宿主菌 ? 降低菌體培養(yǎng)的速度 溫度 (1530℃ ), 降低轉(zhuǎn)速 讓表達(dá)產(chǎn)物可溶化
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