蛋白質(zhì)制備資料(編輯修改稿)
2024-11-04 05:29 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 249。jiāo)凝膠,pH,4,10,pH4,pH10,大小(d224。xiǎo)降低,遷移方向,蛋白質(zhì)條帶,SDS聚丙烯酰胺凝膠,蛋白質(zhì)的 雙向電泳,第十四頁，共三十二頁。,〔五〕用PAG電泳別離的大分子的檢測(jiǎn c232。),檢出方法(fāngfǎ)：,1.考馬斯亮藍(lán)染色法,此染料靈敏度比氨基(ānjī)黑高，最低檢出極限為0.3～1μg。,2.銀染色法,是利用銀離子與蛋白質(zhì)以鹽或配價(jià)絡(luò)鹽的形式結(jié)合， 后由甲醛將銀離子復(fù)原成可見的銀顆粒。,3.熒光染色技術(shù),熒光胺與伯胺專一結(jié)合后得到熒光加成產(chǎn)物，可用于PAG 上蛋白質(zhì)的檢測且靈敏快速。,第十五頁，共三十二頁。,4.酶活性染色法,是利用(l236。y242。ng)酶的專一催化反響進(jìn)行染色。分兩種：,⑴酶的底物或產(chǎn)物有熒光，反響(fǎny236。ng)后可檢測熒光的消失和出現(xiàn)。,⑵酶催化反響直接或間接地與化學(xué)反響耦聯(lián)，而這個(gè)化學(xué)反響能產(chǎn)生顏色很深的不溶性產(chǎn)物(chǎnw249。)，故能指示該酶在凝膠上的位置。,5.專一性配體結(jié)合檢測法,具有熒光或放射性的配體與凝膠上的蛋白質(zhì)專一結(jié)合后， 可用熒光檢測法或放射自顯影法檢測結(jié)合的配體。,6.用熒光標(biāo)記的抗體檢測,用熒光標(biāo)記待檢蛋白質(zhì)的抗體，標(biāo)記抗體進(jìn)入凝膠后那么與待檢蛋白質(zhì)結(jié)合，洗去未結(jié)合的抗體后，經(jīng)紫外光照射，即可檢出熒光的位置。,7.凝膠上蛋白質(zhì)的定量檢出,放射化學(xué)和電泳相結(jié)合，可以定量測定。用微量光密度計(jì)也可對凝膠進(jìn)行掃描定量測定。,第十六頁，共三十二頁。,四、凝膠免疫電泳,凝膠免疫電泳：將利用瓊脂作支持介質(zhì)(ji232。zh236。)的區(qū)帶電泳別離和 專一性免疫沉淀反響相結(jié)合的免疫化學(xué)方法。,〔一〕免疫電泳原理(yu225。nlǐ),,,+,免疫電泳原理(yu225。nlǐ)示意圖,此法的特點(diǎn)是把電泳和免疫擴(kuò)散結(jié)合起來，具有很高的靈敏度和分辨率，樣品需要量少，操作簡便。,免疫血清,第十七頁，共三十二頁。,〔二〕火箭(huǒji224。n)免疫電泳,免疫擴(kuò)散與免疫電泳相結(jié)合，測定(c232。d236。ng)混合蛋白質(zhì)中某一蛋白質(zhì)的量。,,,,+,+,,電 泳前,電 泳后,火箭(huǒji224。n)免疫電泳示意圖,此法可測量微量抗原物質(zhì)，也可測量微量抗體物質(zhì)。,第十八頁，共三十二頁。,〔三〕交叉(jiāochā)免疫電泳〔雙向免疫電泳〕,是常規(guī)凝膠電泳和火箭(huǒji224。n)免疫電泳的結(jié)合，是一種定量蛋白質(zhì)的有效方法。,,,,,,,,+,+,,A,B,C,交叉(jiāochā)免疫電泳步驟示意圖,此法的精確性，取決于沉淀峰的形狀、清晰的度、沉淀峰重疊的數(shù)目以及界限是否明確。,第十九頁，共三十二頁。,五、高效(ɡāo xi224。o)毛細(xì)管電泳,能用于別離多種生物(shēngw249。)分子，也可用于手性化合物的別離。,〔一〕毛細(xì)管電泳(di224。n yǒnɡ)特點(diǎn),,高壓電源,檢測器,記錄儀,毛細(xì)管電泳儀圖解,第二十頁，共三十二頁。,高效(ɡāo xi224。o)毛細(xì)管電泳特點(diǎn)：
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