chapter親和層析ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-02 13:27 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 、載體蛋白 目的產(chǎn)物與相應的配基 親和配基 酶的抑制劑 抗體 A蛋白 凝集素 輔酶和磷酸腺苷 色素配基 過渡金屬離子 組氨酸 肝素 親和色譜介質(zhì) 當配基的分子量較小時，將其直接固定在載體上，會由于載體的 空間位阻 ，配基與生物大分子不能發(fā)生有效的親和吸附作用，如圖 714a所示。 如果在配基與載體之間連接間隔臂，可以增大配基與載體之間的距離，使其與生物大分子發(fā)生有效的親和結合。 圖 714 間隔臂的作用 間隔臂 親和吸附劑及其制備方法 偶聯(lián)（親和吸附劑的制備） 配體一定，改造載體（基質(zhì)） 1）基質(zhì)活化： 不同的載體活化需要不同的 活化劑 。 常用：溴化氰（ CNBr）、環(huán)氧氯丙烷、 1,4丁二醚、戊二醛、高碘酸鹽、苯醌等。 親和色譜介質(zhì) 溴化氰法是最早使用且最常用的活化方法。 如用 CNBr 作用于葡聚糖和瓊脂糖的糖羥基 2）引入連接臂 （ space arm） 又稱手臂（ spacer） “ 接臂 ” 的目的： 克服 影響配基與生物大分子的結合的 空間障礙 。 “ 接臂 ” 的途徑： 常用二胺化合物（丁二胺、乙二胺、己二胺）。 目前帶有各種手臂的系列載體已有商品供應。如：AHSepharose 4B 手臂 作用：減少親和作用空間位阻 連接：通過化學反應與活化基團連接 手臂化合物： 乙二胺 NH2CH2CH2NH2 ? 已二胺 NH2CH2CH2CH2CH2NH2 ? 6氨基已酸 NH2CH2CH2CH2CH2COOH ? 環(huán)氧氯丙烷 ? 1， 4 丁二醇縮水甘油醚 親和吸附等溫線 親和吸附平衡基本上可以用 Langmuir 或 Freundlich等溫式表達 。 在吸附濃度較低的范圍內(nèi) ， 吸附等溫線近似為線形 Freundlich型吸附等溫式 其中 cm的指數(shù)值越小 ， 表示親和結合力越強 ， 當指數(shù)值小于 ， 吸附平衡可以用矩形等溫式近似 。 親和吸附平衡 親和吸附平衡 色素親和吸附平衡 色素配基 CB為一種生物模擬色素 ， 具有特殊的化學結構 ， 可以和多種蛋白通過不同機理結合 。 CB分子的多個 芳環(huán) 使其具有一定 疏水性 ， 可以與蛋白質(zhì)非極性表面發(fā)生疏水性相互作用； CB分子的 發(fā)色基團 具有與 NAD+和 NADP+相類似的構象和尺寸 ， 可以與核苷酸依賴酶發(fā)生特異性結合； CB分子帶有 磺酸基 ， 具有陽離子交換基的性質(zhì) ， 可以和蛋白質(zhì)發(fā)生靜電相互作用 。 親和吸附平衡 色素配基與載體介質(zhì)有吸附作用 ， 在高鹽濃度下 ， 兩者間可發(fā)生強疏水性作用 ，造成色素配基倒伏 ， 導致吸附容量下降 、 。 P328 親和層析包括 進料吸附 、 清洗 、 洗脫和介質(zhì)再生 幾個步驟 。 吸附操作要保證吸附介質(zhì)對目標產(chǎn)物有
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1