項目層析技術ppt課件(編輯修改稿)
2025-06-03 08:39 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 輕搖動 ， 至流動的硅膠均勻地鋪在玻璃片上 ,→ 水平放置 ， 室溫陰干至無水氣存在 → 于 105℃ 烘箱中 活化 2h→ 干燥器 中冷卻備用 ? 點樣 ? 選取制備好的薄板一塊，在距底邊 2cm 的水平直線上選幾個點，各 點間距 2cm，離板邊約有 lcm的距離。用毛細管分別點上不同的樣品于各個點，樣品量控制在 5~10μg， 斑點直徑 一般為 2— 3 mm，干后再點一次。 ? 展層 ? 點樣完畢，待薄層上樣品 自然干燥 后，將薄板置于盛有層析溶劑的層折缸中，薄板與液面成 15℃ 左右的夾角，點有樣品的一端浸入溶劑中，深達 、擴展劑液面應低于點樣線，蓋好層析槽蓋， 自下向上展層 ，當展層溶劑到達離薄板頂端約 1cm 處時取出薄板，標出溶劑前沿位置，用熱風吹干。 ? 顯色： ? 除盡溶劑后用噴霧器均勻地噴上顯色劑，烘干使其顯色，計算 Rf值 。 或使之出現(xiàn)各種有色的斑點，與標準進行對照比較，可確定其成分。 ? Rf= 起始線到樣品斑點中心距離 /起始線到溶劑前沿的距離 吸附層析技術 吸附層析法（液 固色譜法， LSC） 原理 利用固定相的固體吸附劑表面對不同組分 吸附力的大小 及洗脫液對它的溶解作用（解吸作用）的差異進行分離。 特點 適合分離不同種類的化合物 (醇類和芳香烴） 二、吸附劑 ? 吸附劑是具有大表面積的活性多孔固體，活性多孔固體與待分離物質(zhì)的極性官能團作用。 ? 常用的吸附劑有 活性炭 、 硅石 、 氧化鋁 、 羥基磷灰石等。 ? 羥基磷灰石（ HA） [Ca10(PO4)6.(OH)2],可用于分離蛋白質(zhì)與核酸。其表面有 Ca2+和 PO43兩種帶電基團； 酸性和中性蛋白質(zhì)可與 Ca2+結合；堿性蛋白質(zhì)可與 PO43結合。 HA柱層析最重要的用途之一是分離單鏈 DNA和雙鏈 DNA，因為它對雙鏈 DNA的親和力大于單鏈 DNA。 分配層析技術 分配層析法（液 液層析法， LLC） 原理 利用混合物在兩種不相混溶的液相（固定相和流動相）之間的 分配系數(shù) 的不同而達到分離各組分的目的 。 固定相液體均勻覆蓋于載體表面，流動相流過固定相。 分配系數(shù)： 當一種溶質(zhì)分布在兩個互不相溶的溶劑中時，它在兩
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