凝膠層析原理ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-13 16:25 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 相中的濃度 Cm 特定的溫度：常數(shù) K大：被固定相吸附的牢固，隨流動相 的移動速度較慢。 純化生物物質(zhì)的純度 取決于混合物中各組分 K 值的差異程度 混合物中各組分若 K值相差較大 , 則能較易地把混合物中的生物物質(zhì)分離 。 反之 ,K值相差較小 ,不易把混合物中的生物物質(zhì)分離 1 2 3 4 5 K=1 K= 32 16 16 8 16 8 4 12 12 4 2 8 12 8 2 90 10 100 1 18 81 凝膠層析 Gel Chromatography 凝膠過濾 （ gel filtration） (Porath, Flodin, 1959) 分子篩層析（ molecular sieve chromatography） (Hjert233。n, Mosbach, 1962) 排阻層析 （ exclusion chromatography） (Pedersen, 1962) 指混合物隨流動相經(jīng)固定相的層析柱時，混合物中各組份按其分子大小不同而被分離的技術。 一、基本原理 固定相（凝膠） ? —— 三維空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) A good gel for gel filtration contains about 95% water ■ 凝膠層 析法： 樣品 固 定 相 流 動 相 小分子 被延滯 小分子 大分子 較 快流出 分子篩效應 ： 分子大小不同 ,在凝膠受到的阻滯作用有差異 ,從而造成各組分在凝膠柱中的遷移速度不同得到分離 。 凝膠層析過程的數(shù)理關系 柱床體積 (VT) VT = 1/4 ?D2h 洗脫體積 （ Ve） ? 即欲分離物質(zhì)通過層析柱洗脫下來所需洗脫液的總體積 。 外水體積（ V0） 即存在于柱床內(nèi)凝膠外面空隙之間的水相體積，相應于一般層析法中流動相的體積。 內(nèi)水體積 （ Vi） 即凝膠顆粒內(nèi)部所含水相的體積 ， 它可從干凝膠顆粒重量和吸水重量求得 。 凝膠干體積 （ Vg） 柱床體積 VT 凝膠干體積 Vg 內(nèi)水體積 Vi 存在于柱床內(nèi)凝膠外面空隙之間的水相體積，相應于一般層析法中流動相的體積。 顆粒內(nèi)部所含水相的體積它可從 干凝膠顆粒重量 和吸水重量相減求得。 凝膠體積以及
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