凝膠層析原理ppt課件(更新版)
【正文】 吸附的過(guò)程是可逆的 化學(xué)吸附： 由原子價(jià)力的作用引起 。 外水體積（ V0） 即存在于柱床內(nèi)凝膠外面空隙之間的水相體積，相應(yīng)于一般層析法中流動(dòng)相的體積。 （商品名為 Sepharose) ■ 各 種 層 析 膠 體 ： Pharmacia Sephadex Sepharose Sephacryl Sephacel glucose agarose glucose + acrylamide cellulose BioRad BioGel P BioGel A acrylamide agarose 六 .其它條件選擇 柱短而粗 ,則易使樣品稀釋 ,柱長(zhǎng)而窄 ,則柱的管壁效應(yīng)較大 ,會(huì)造成拖尾現(xiàn)象 ： 量適當(dāng) , 粘度小 ： 每種樣品分離所用的緩沖洗脫液應(yīng)根據(jù) 使樣品穩(wěn)定 的原則使用 七、應(yīng)用 Elution volume (ml) Albumin NaCl ? Desalting in a simple column 測(cè)分子量 Ve log Mr 對(duì)同一類(lèi)型的化合物 ,洗脫特性與組分的分子量有關(guān) ,流過(guò)凝膠柱時(shí) ,按分子量 (MW)大小順序流出 ,MW大的走在前面 ,Ve與 MW的關(guān)系可用下式表示 : Ve = K1 K2lgMW K1,K2 為常數(shù) , MW為分子量 實(shí)驗(yàn)： 凝膠層析法分離蛋白質(zhì) 血紅蛋白 64,480 二硝基苯 魚(yú)精蛋白 2,00012,000 Sephadex G50 孔徑 1,50030,000 一、原理： Kd=0 Kd=1 裝柱 ※ 先用蒸餾水趕走層析柱中的死體積 ※ 凝膠不能有氣泡和分層現(xiàn)象 ※ 裝柱結(jié)束后要保持凝膠表面平整 二、操作注意點(diǎn)： ■ 凝膠柱 的 裝填 方法： 裝 填 膠 體 暫 停 流 洗 X 繼 續(xù) 流 洗 已 堆 積 沉 淀 中 上 清 緊 密 堆 積 檢 查 好 管 柱 是 否 暢 通 1 2 Gel Gel 繼 續(xù) 流 洗 加樣 ※ 使液面和凝膠表面相切，關(guān)閉出口 ※ 加樣時(shí)盡量不要破壞凝膠面 ※ 讓樣品進(jìn)入凝膠以后在加蒸餾水開(kāi)始洗脫 血紅蛋白和二硝基苯 魚(yú)精蛋白的洗脫體積？ 三、結(jié)果要求：
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