凝膠層析原理ppt課件(參考版)
2025-01-20 16:25本頁面
【正文】 ,重復(fù)性好 ,可進(jìn)行大量樣品的分離純化 四 、 凝膠層析的缺點(diǎn) 樣品和洗脫液的粘度很低 孔徑大小非常有限 ,所以可被純化的物質(zhì)的 分子量范圍受到限制 對(duì)某些溶質(zhì)分子具有吸附作用 五、凝膠的結(jié)構(gòu)與性能 1959年 Porath和 Flodin合成 （ 商品名為 Sephadex） （ 1） 結(jié)構(gòu)： 基本骨架： 葡聚糖 （ dextran） 交聯(lián)劑： 3氯代 1 ,2環(huán)氧氯丙烷使葡聚糖之間通過醚鍵交聯(lián)聚合而成的 三維空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) （ 2）特點(diǎn)： 交聯(lián)度： ? 交聯(lián)劑越多 交聯(lián)度越大 網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)越緊密 ? 交聯(lián)劑越少 交聯(lián)度越小 網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)越疏松 化學(xué)性質(zhì)： 穩(wěn)定 ,不溶于水 、 鹽 、 弱酸 、堿和一般有機(jī)溶劑 , 耐熱耐堿不耐強(qiáng)酸 （ 2）特點(diǎn)： Sephadex的分級(jí)范圍 G10 700 G15 1,500 G25 1,0005,000 G50 1,50030,000 G75 3,00070,000 G100 4,000150,000 G150 5,000400,000 G200 5,000800,000 吸水性 ? G類的型號(hào) 表示每克干凝膠吸水量（ ml） x10 如 G50 每克干凝膠吸水量為 5ml ? 大孔凝膠 ? 工作范圍的下限幾乎是 Sephadex的上限 ? 可分離 MW40萬以上 的物質(zhì) ? 可用來分離核酸及病毒 。 VT = 1/4 ?D2h 外水體積 V0 VT = Vg + V0 + Vi 數(shù)理關(guān)系 Ve –Vo Kd = ———— Vi 分配系數(shù)（ Kd ）： 特點(diǎn)： （ 1）與被分離物質(zhì)分子的大小和凝膠顆粒孔隙的大小有關(guān) （ 2）與柱的長(zhǎng)短粗細(xì)無關(guān) 每個(gè)溶質(zhì)分子在流動(dòng)相和固定相之間有一個(gè)特定的分配系數(shù)（ Kd） Ve=Vo+KdVi (2)Ve = Vo + Vi Kd = 1 ?分子完全不被排阻 ?完全向凝膠顆粒內(nèi)部擴(kuò)散 ?在兩相分配的比值為 1,最后流出 . (1)Ve = Vo Kd = 0 ?分子完全被排阻于凝膠顆粒之外 ?全部分布于流動(dòng)相里 , ?最先流出 。 顆粒內(nèi)部所含水相的體積它可從 干凝膠顆粒重量 和吸水重量相減求得。 內(nèi)水體積 （ Vi） 即凝膠顆粒內(nèi)部所含水相的
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