葡聚糖凝膠柱層析分離純化蛋白質(zhì)(參考版)
2025-01-21 19:27本頁面
【正文】 4. 掌握裝柱、加樣、洗脫、收集樣品的操作。 2. 凝膠層析分配系數(shù)：被分離的化合物被凝膠排阻的程度。 ② 實(shí)驗(yàn)過程中需密切注意保持層析柱中的凝膠始終處于蒸餾水中，防止蒸餾水排空。 5. 結(jié)果分析： 分析為什么這兩種蛋白能在凝膠柱中分離開。 4. 樣品收集： 樣品一旦加入后馬上用燒杯收集流出液，注意柱床上要不斷加水，直到兩種蛋白全部洗脫。 ? 然后打開出口，使樣品進(jìn)入床面，滴加 1~2倍樣品體積的蒸餾水 （注意：輕柔滴加）。 ? 用移液槍將 200181。 ? 反復(fù)加蒸餾水，平衡 10min。 ? 層析柱洗凈后，將層析柱燒結(jié)板下端的死區(qū)用蒸餾水充滿 （注意：不得留有氣泡，可多加約 1cm高水層，使柱內(nèi)凝膠通過沉積作用更加均勻）， 然后關(guān)閉層析柱的出口。 ? 待分離的蛋白質(zhì)混合物： 蛋白 A（黃色，分子量在 G 50的分離范圍內(nèi)）蛋白 B（藍(lán)色，分子量大于 G 50的分離范圍） 實(shí)驗(yàn)步驟 凝膠的準(zhǔn)備 裝柱 加樣與洗脫 樣品收集 ：稱取Sephadex G 50 1g，置于錐形瓶中，加蒸餾水約30ml，在沸水浴中煮沸1h，冷卻到室溫后再裝柱。 G25表示： 1g干膠吸水 ， 依次類推 。 反之亦然 。
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