凝膠層析法測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量(參考版)
2025-05-17 16:54本頁面
【正文】 ? 你認(rèn)為本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵在哪里？上樣前為什么要將柱中多余液體放出？ 。也要防止液體流干，使凝膠混入大量氣泡，影響液體在柱內(nèi)的流動(dòng)，導(dǎo)致分離效果變壞，不得不重新裝柱。操作過程中，層析柱內(nèi)液面不斷下降，則表示整個(gè)系統(tǒng)有漏氣之處，應(yīng)仔細(xì)檢查并加以糾正。 注意事項(xiàng) ? 各接頭不能漏氣，連續(xù)用的小乳膠管不要有破損，否則造成漏氣、漏液。 計(jì)算 分子量的測定和計(jì)算，一般都采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法。短期可保存在水相中，加入防腐劑或加熱滅菌后于低溫保存。 ? 4. 收集與鑒定 用自動(dòng)部分收集器收集流出液，每管 4ml，紫外檢測儀 280nm波長處檢測，最高的一個(gè) OD值時(shí)的體積即為吸收峰的洗脫體積Ve。最后加入少量洗脫液于凝膠上，使高出床表面 3～ 5cm，旋緊上口螺絲帽，柱進(jìn)水口連通恒流泵，調(diào)好流速，以每管 3ml/10min流速開始洗脫。先打開柱的出口，待柱中洗脫液流至距床表面 1～ 2mm時(shí)，關(guān)閉出口，用滴管將 1ml樣品慢慢地加至柱床表面，應(yīng)避免將床面凝膠沖起，打開出口并開始計(jì)算流出體積，當(dāng)樣品滲入床中接近床表面 1mm時(shí)關(guān)閉出口。 ? 3. 上樣與洗脫 樣品上柱是實(shí)驗(yàn)成敗
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