凝膠層析法測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量(編輯修改稿)
2025-06-18 16:54 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ：層析柱、恒流泵、紫外檢測儀、自動部分收集器 ? 試劑 ? 待測樣品：胰島素、牛血清白蛋白 ? 藍(lán)色葡聚糖 2021； Sephardex G75；洗脫劑 實驗步驟 ? 1．凝膠溶脹 凝膠顆粒要求大小比較均勻 ，可流速穩(wěn)定，結(jié)果較好。 取葡聚糖 Sephardex G75干粉，加過量的蒸餾水室溫充分溶脹一天（溶脹時間因凝膠交聯(lián)度不同而不同），或沸水浴中溶脹 3小時，這樣可大大縮短溶脹時間，而且可以殺死細(xì)菌和霉菌，并可排出凝膠內(nèi)氣泡。溶脹過程中注意不要過分?jǐn)嚢?，以防顆粒破碎。待溶脹平衡后用傾瀉法除去不易沉下的細(xì)小顆粒，最后凝膠經(jīng)減壓抽氣除去氣泡，即可準(zhǔn)備裝柱。 ? 2. 裝柱與平衡 裝柱前須將凝膠上面過多的溶液傾出，將層析柱垂直裝好。關(guān)閉出口，向柱管內(nèi)加入約 1/3柱容積的洗脫液，然后在攪拌下，將濃漿狀的凝膠連續(xù)地傾入柱中，使之自然沉降，待凝膠沉降約 2— 3cm后，打開柱的出口，調(diào)節(jié)合適的流速，使凝膠繼續(xù)沉集，待沉集的膠面上升到離柱的頂端約 5cm處時停止裝柱，關(guān)閉出水口。裝柱要求連續(xù)、均勻、無氣泡、無 “ 紋路 ” 。 將洗脫
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