凝膠層析法測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量(已修改)
2025-05-29 16:54 本頁面
【正文】 凝膠層析法測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量 實驗?zāi)康? ? 掌握凝膠層析的基本原理。 ? 學(xué)習(xí)利用凝膠層析法測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量的實驗技能。 實驗原理 ? 凝膠層析法也稱分子篩層析法，是利用具有一定孔徑大小的多孔凝膠作固定相的層析技術(shù)。當(dāng)混合物隨流動相經(jīng)過凝膠層析柱時，其中各組分按其分子大小不同而被分離的技術(shù)。該法設(shè)備簡單、操作方便、重復(fù)性好、樣品回收率高。 ? 凝膠是一種不帶電的具有三維空間的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)、呈珠狀顆粒的物質(zhì)，每個顆粒的細(xì)微結(jié)構(gòu)及篩孔的直徑均勻一致，像篩子，小的分子可以進(jìn)入凝膠網(wǎng)孔，而大的分子則排阻于顆粒之外。當(dāng)含有分子大小不一的蛋白質(zhì)混合物樣品加到用此類凝膠顆粒裝填而成的層析柱上時，這些物質(zhì)即隨洗脫液的流動而發(fā)生移動。大分子物質(zhì)沿凝膠顆粒間隙隨洗脫液移動，流程短，移動速率快，先被洗出層析柱；而小分子物質(zhì)可通過凝膠網(wǎng)孔進(jìn)入顆粒內(nèi)部，然后再擴(kuò)散出來，故流程長，移動速度慢，最后被洗出層析柱，從而使樣品中不同大小的分子彼此獲得分離。若分子大小介于上述完全排阻或完全滲入凝膠的物質(zhì)，則居二者之間從柱中流出。總之，各種不同相對分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)分子，最終由于它們被排阻和擴(kuò)散的程度不同，在凝膠柱中所經(jīng)過的路程和時間也不
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