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凝膠層析法測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量-在線瀏覽

2024-07-09 16:54本頁(yè)面
  

【正文】 析柱,從而使樣品中不同大小的分子彼此獲得分離??傊?,各種不同相對(duì)分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)分子,最終由于它們被排阻和擴(kuò)散的程度不同,在凝膠柱中所經(jīng)過(guò)的路程和時(shí)間也不同,從而彼此可以分離開來(lái)。在一根凝膠柱中,凝膠顆粒間空隙所含水相體積為外水體積 VO,不能進(jìn)入凝膠孔徑的那些大分子,當(dāng)洗脫體積為時(shí) VO,出現(xiàn)洗脫峰。 利用 Andrews的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)式: lgMr = a/b— Ve/bVo 式中, Ve為洗脫體積。 Vo為外水體積,Mr為相對(duì)分子質(zhì)量, a和 b為常數(shù)。例如 Sephardex G75的分級(jí)范圍是 300080000的球形分子。 儀器和試劑 ? 儀器:層析柱、恒流泵、紫外檢測(cè)儀、自動(dòng)部分收集器 ? 試劑 ? 待測(cè)樣品:胰島素、牛血清白蛋白 ? 藍(lán)色葡聚糖 2021; Sephardex G75;洗脫劑 實(shí)驗(yàn)步驟 ? 1.凝膠溶脹 凝膠顆粒要求大小比較均勻 ,可流速穩(wěn)定,結(jié)果較好。溶脹過(guò)程中注意不要過(guò)分?jǐn)嚢?,以防顆粒破碎。 ? 2. 裝柱與平衡
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