蛋白質(zhì)聚焦層析-在線瀏覽
2024-09-26 00:21本頁面
【正文】 pH 811） ， 后者屬于中性層析介質(zhì) （ pH49） ? 常用多緩沖劑 （ 流動相 ） 有 Polybuffer96和Polybuffer74（ 分別在 pH69和 pH74范圍內(nèi)有較強緩沖能力 ? 如將他們混合在一起 ， 則較強緩沖能力的 pH范圍為 49 緩沖液和交換樹脂的選擇 ? 緩沖液和多緩沖液交換樹脂每次最大操作范圍是 3pH單位 ? 若是樣品的 pl是已知的，只要選擇對應(yīng)的 pH緩沖液和樹脂即可，最好洗脫位置在 pH梯度的 1/31/2以后 ? 若是未知樣品，應(yīng)先定出 pl值。要求無氣泡 (可先脫氣 ) ? 用一個 高于多緩沖液 pH的起始緩沖液平衡柱子。這祥各種蛋白 在自己的 pl處聚焦 ，并依次洗脫下來，分部收集 操作 ? 操作流程： ? 聚焦層析柱 起始緩沖液平衡 樣液上樣 多緩沖液淋洗 洗脫液解吸附 注意事項 ? 樣品的基本性質(zhì) –在聚焦層析前，樣品最好能提供一些必要的參數(shù)，如： 等電點、溶解度、穩(wěn)定性 等 ? 樣品制備要求 –樣品中不能含有 鹽或強離子型 有機化合物，鹽類等強電解質(zhì)物質(zhì)會 影響聚焦效應(yīng) 蛋白質(zhì)與多緩沖液的分離 ? 一般多緩沖液不干擾酶的測活或氨基酸分析 ? 雖然多緩沖液不影響 考馬斯 亮 蘭反應(yīng) ， 但與銅離子會形成復(fù)合物 ， 所以干擾 Lowry反應(yīng) ? 如用 Lowry反應(yīng)測蛋白有必要將蛋白與多緩沖液分開 。 再生 ? 多緩沖液交換樹脂的再生很容易 ， 只要用 23倍床體積的 1MNaCl在柱內(nèi)洗滌就行了 ? 如果有強結(jié)合力的蛋白未除去 ， 可用 ， 但要立刻用高 pH溶液洗去HCI， 再用所選擇的起始緩沖液平衡后 ， 即可使用 應(yīng)用簡介 聚焦層析最適合于分離某些蛋白質(zhì) 分子量和極性方面的性質(zhì)十分相似，而等電點有區(qū)別 的物質(zhì)。 獲得的純品載脂蛋白 CⅢ 1和 CⅢ 2經(jīng)等電聚焦電泳均呈現(xiàn)一條帶 具體操作 ? 將 100mlPBE94
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