凝膠層析法測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量-文庫吧資料
2025-05-21 16:54本頁面
【正文】 的關(guān)鍵之一，若樣品稀釋或上柱不均，會使區(qū)帶擴(kuò)散，影響層析效果。 將洗脫劑與恒流泵相連，恒流泵出口端與層析柱相連。關(guān)閉出口，向柱管內(nèi)加入約 1/3柱容積的洗脫液，然后在攪拌下，將濃漿狀的凝膠連續(xù)地傾入柱中，使之自然沉降，待凝膠沉降約 2— 3cm后，打開柱的出口，調(diào)節(jié)合適的流速，使凝膠繼續(xù)沉集，待沉集的膠面上升到離柱的頂端約 5cm處時停止裝柱，關(guān)閉出水口。待溶脹平衡后用傾瀉法除去不易沉下的細(xì)小顆粒，最后凝膠經(jīng)減壓抽氣除去氣泡，即可準(zhǔn)備裝柱。 取葡聚糖 Sephardex G75干粉，加過量的蒸餾水室溫充分溶脹一天（溶脹時間因凝膠交聯(lián)度不同而不同），或沸水浴中溶脹 3小時，這樣可大大縮短溶脹時間，而且可以殺死細(xì)菌和霉菌，并可排出凝膠內(nèi)氣泡。在本實(shí)驗(yàn)中用于分離胰島素（ Mr為6000）和牛血清蛋白（ Mr75000）。 葡聚糖凝膠有不同的型號，用于分離不同相對分子質(zhì)量大小的物質(zhì)。它是自加樣品開始到該組分的洗脫峰（峰頂）出現(xiàn)時所流出的體積。 凝膠顆粒內(nèi)部孔穴的總體積為內(nèi)水體積 Vi，能全部滲入凝膠的那些小分子，當(dāng)洗脫體積為 VＯ +Vi時，出現(xiàn)洗脫峰。
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