薄層層析柱層析ppt課件(參考版)
2025-05-06 05:18本頁面
【正文】 ?凝膠過濾層析 。這種方法曾被稱為分子篩。而進入孔徑的分子也按分子量大小大致分離成不同的區(qū)帶?？刂平宦?lián)度以形成不同孔徑的網(wǎng)狀結構。 支持物是人工合成的交聯(lián)高聚物，在水中膨脹后成為凝膠。洗脫時，增加溶液的離子強度，如改變 pH，增加鹽濃度，離子被取代而解吸下來。對于蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸及核苷酸的分離分析有極好的分辨力。帶陰離子基團的，如 DEAE— （二乙基胺乙基）和QAE— （四級胺乙基）等為陰離子交換劑。 ?分配層析 ?離子交換層析 支持物是人工交聯(lián)的帶有 能解離基團的有機高分子 ，如離子交換樹脂、離子交換纖維素、離子交換凝膠等。常用支持物是硅膠、纖維素和淀粉等，這些親水物質(zhì)能儲留相當量的水。 ?吸附層析 在 支持物上形成部分互溶的兩相系統(tǒng) 。 洗脫溶劑的解析能力的強弱順序是：醋酸、水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、醚、氯仿、苯、四氯化碳和己烷等。 吸附劑在使用前須先用 加熱脫水 等方法活化。 常用吸附劑的吸附力的強弱順序為：活性炭、氧化鋁、硅膠、氧化鎂、碳酸鈣、磷酸鈣、石膏、纖維素、淀粉和糖等。 吸附劑的吸附力強弱，是由能否有效地接受或供給電子，或提供和接受活潑氫來決定。 ? 柱層析時，柱子要致密緊實，無氣泡。 四、實驗關鍵及注意事項： ? 薄層層析時，薄層板的制備要厚薄均勻，表面平整光潔。蓋好瓶蓋，觀察展開劑前沿上升到一定高度時取出，盡快在板上標上展開劑前沿位置。在層析缸中加入配好的展開溶劑，使其高度不超過 1cm。點樣要輕，不可刺破薄層。若因樣品溶液太稀，可重復點樣，但應待前次點樣的溶劑揮發(fā)后方可重新點樣，以防樣點過大，造成拖尾、擴散等現(xiàn)象，而影響分離效果。 ? 點樣 先用鉛筆在距薄層板一端 1cm處輕輕劃一橫線作為起始線，然后用毛細管吸取樣品，在起始線上小心點樣，吹干。也可買市售的硅膠板切割成適宜大小備用。在燒杯中放入 2g硅膠，加入 5— 6ml蒸餾水，調(diào)成糊狀。薄層應盡量均勻且厚度要固定。整個過程都應有洗脫劑覆蓋吸附劑。 【 柱色譜操作步驟 】 ? 進樣 待酒精全部浸潤氧化鋁，液面剛好流至濾紙面時，立即用滴管從層析柱管中心加入待分離樣品溶液，當此溶液流至接近濾紙面時，立即用少量溶劑洗下管壁的有色物質(zhì)，如此連續(xù) 2— 3次，直至洗凈為止。 三、基本操作 ? 正確裝柱、制板、點樣及分離操作 薄層板在不同的層析缸中展開的方式 柱色譜裝置圖 裝柱 ?用鑷子取少許脫脂棉放于干凈的色譜柱底部，輕輕塞緊，關閉活塞，通過一干燥的玻璃漏斗向柱中慢慢加入色譜柱用中性氧化鋁 10g，并用橡皮塞輕輕敲打色譜柱下部，使填裝緊密，在上面加一片小圓濾紙或脫脂棉使表面水平。此時常用盛有顯色劑溶液的噴霧器噴板顯色。 ②紫
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