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離子交換柱層析法分離氨基酸(參考版)

2025-05-17 06:35本頁面
  

【正文】 。 實驗結(jié)果 根據(jù)氨基酸的解離性質(zhì) , 分析該實驗條件下氨基酸從層析柱洗脫下來的順序 。 6. 洗脫及氨基酸的鑒定 向各管收集液中加 1mL水合茚三酮顯色劑并混勻 , 在沸水浴中準(zhǔn)確加熱 5min后冷卻至室溫 , 再加入 3mL的 %硫酸銅溶液 。 當(dāng)樣品液彎月面靠近樹脂頂端時 , 即刻加入少量檸檬酸緩沖液沖洗加樣品處數(shù)次 , 然后注入檸檬酸緩沖液至液面高 3- 4cm左右 , 接恒流泵 。 3. 平衡 將緩沖液瓶與恒流泵相連 , 恒流泵出口與層析柱入口相連 , 樹脂表面保留 3- 4cm液層 , 開動衡流泵 , 以 24ml/h流速平衡 , 直至流出液 pH與洗脫液相同 。 ? 裝柱要求連續(xù)、均勻,無紋格、無氣泡,表面平整。 將柱垂直至于鐵架上 。 最后用欲使用的緩沖液浸泡 。 用 4倍體積的 2mol/L的鹽酸浸泡 1小時 , 傾去清液 , 洗至中性 。 利用氨基酸可與茚三酮反應(yīng)生成有色化合物進行氨基酸鑒定 。 考慮因素: 大分子物質(zhì)選用凝膠 , 其次選用纖維素 根據(jù)分離過程的實驗條件 強酸強堿 — 應(yīng)用廣泛 弱酸型 — 只能在堿性 pH范圍內(nèi)使用 弱堿型 — 只能在酸性 pH范圍內(nèi)使用 ( 二 ) 緩沖液的選擇 原則 :不能發(fā)生化學(xué)反應(yīng) , 所帶電荷應(yīng)與樣品一致 。 目數(shù) :離子交換樹脂的顆粒直徑大小 Dowex 50 為 2050目 Dowex 20 840?m
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