親和層析ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-10 06:07 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 親和吸附劑結(jié)合，當(dāng)結(jié)合力較強(qiáng)時(shí)，配體與有效成分緊密結(jié)合，隨著樣品的加入，親和成分恒定增加并不斷地吸附上柱，形成致密的復(fù)合物帶，使吸附容量增至最大，達(dá)到飽和。影響吸附容量除親和力外和還與 pH、離子強(qiáng)度有關(guān)。 復(fù)合物帶 海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院 wss26 2022/2/11 樣品中有效成分在親和吸附劑上的吸附量，除了與它們之間的親和力有密切關(guān)系外，還與樣品的 pH值和離子強(qiáng)度 有關(guān)系。 海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院 wss27 2022/2/11 五、層析步驟 ? 樣品制備 結(jié)合步驟 裝柱操作 ? 流速控制 洗脫方法 淋洗 ? 洗脫目標(biāo)樣品 柱子再生 選擇配體 凝膠與配體偶聯(lián) 柱子平衡 海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院 wss28 2022/2/11 洗脫方法 海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院 wss29 2022/2/11 ： 凡是能與配體競(jìng)爭(zhēng)酶的游離配體，都十分強(qiáng)烈地影響著結(jié)合酶的洗脫過(guò)程。游離配體濃度若與配體濃度相同，則可直接從基質(zhì)上洗脫小結(jié)合的酶。同時(shí)應(yīng)根據(jù)酶與配體親和力的大小確定洗脫液的濃度。 ： 通過(guò)改變洗脫液的條件（ pH、離子強(qiáng)度、溫度 ℃和介電常數(shù)），即能改變蛋白質(zhì)的構(gòu)象，降低蛋白質(zhì)與配體的親和力、不損害蛋白質(zhì)與吸附劑的穩(wěn)定性。 海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院 wss30 2022/2/11 內(nèi)容提要 第一節(jié) 基本原理 第二節(jié) 操作 第三節(jié) 提高吸附劑的操作容量 第四節(jié) 應(yīng)用實(shí)例 海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院 wss31 2022/2/11 第三節(jié) 提高吸附劑的操作容量 親和吸附劑的操作容量，受以下因素的影響： ? 配體性質(zhì) ? 配體在吸附劑中的含量 ? 配體與吸附物結(jié)合時(shí)的位阻效應(yīng)大小 ? 基質(zhì)的多孔性 ? 操作條件等 海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院 wss32 2022/2/11 一、引入間隔手臂 小分子配體直接連接于瓊脂糖上會(huì)產(chǎn)生無(wú)效吸附，其原因是由于載體的空間位阻關(guān)系，使大分子化合物（親和物）不 能直接接觸到配 體。因此，通過(guò)在 載體與配體之間引 入適當(dāng)長(zhǎng)度的“手 臂”減少載體的空 間位阻，增加配 體的活動(dòng)度。 海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院 wss33 2022/2/11 對(duì)氨基苯 β硫代吡喃半乳糖苷 氨乙基乙酰胺 常見(jiàn)的間隔臂是 6～ 8個(gè)碳原子的碳?xì)滏?，基質(zhì)到配體的長(zhǎng)度為 ～ 1nm；或用長(zhǎng)達(dá) 17個(gè)碳原子。 間隔臂 :不同長(zhǎng)度的間隔臂（ B＝ 1nm）， (C=)對(duì)靶酶的親和力的差異。 海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院 wss34 2022/2/11 二、增加配體取代的程度 ? 基質(zhì)的活性基團(tuán)增多，配體結(jié)合量增加，操作容量亦大；由于位阻效應(yīng)而影響配體的偶聯(lián)量，故控制偶聯(lián)反應(yīng) 的條件可增 加配體的偶 聯(lián)數(shù)量。 海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院 wss35 2022/2/11 三、減少結(jié)合鍵增加配體與蛋白質(zhì)的互補(bǔ)效應(yīng) ? 以蛋白質(zhì)與多肽為配體時(shí)，以最少的共價(jià)鍵連接至載體，利于保護(hù)蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)及生物活性； ? 控制偶聯(lián)反應(yīng)的 pH，減少蛋白質(zhì)分子與基質(zhì)連接的鍵；位點(diǎn)的減少，可以結(jié)合更多的蛋白質(zhì)，提高結(jié)合容量。 四、殘留活化基團(tuán)的封閉 ? 封閉多余的活化基團(tuán)，避免非
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1