掌握層析chromatography的概念(編輯修改稿)
2025-06-17 10:53 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 l Chromatography 一、定義 凝膠層析 … 是按照 被分離物質(zhì)分子大小 ,經(jīng)過具有一定孔徑的多孔物質(zhì)進(jìn)行分離的一種方法 。 其又稱為凝膠過濾或 分子篩過濾 或排阻層析 。 主要機理是 分子篩效應(yīng) ,當(dāng)被分離物質(zhì)流經(jīng)凝膠柱時 ,因各組份的 分子大小不同 ,在凝膠受到的 阻滯作用有差異 ,從而造成各組分在凝膠柱中的 遷移速度不同 得到分 離。 二 .基本原理 流動相（洗脫液） 固定相（凝膠） 原理 ：被分離物質(zhì)中各組分的 分子量不同 。 進(jìn)入具有一定孔徑的凝膠柱后 ,較 大 的分子 不能進(jìn)入凝膠孔隙 中 ,被排阻在外 ,而較小 的分子則 能進(jìn)入凝膠孔隙 ,加入洗脫劑后 ,大分子 就隨洗脫劑從凝膠間隙洗脫下來 ,受到的 阻力小 ,其 流速較快 ,小分子 物質(zhì)從上一層凝膠孔隙中出來又?jǐn)U散到下一層凝膠孔隙中 ,這樣 多次反復(fù) ,大分子物質(zhì)先從柱中流出 ,小分子物質(zhì)后流出 。 小分子 由于擴散作用進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部而 被滯留 ,大分子 被排阻在凝膠顆粒外面 ,在顆粒之間 迅速通過 。 凝膠層析過程的數(shù)理關(guān)系 ? 柱床體積 (VT) …… 即凝膠體積以及顆粒 ? 內(nèi)外間隙體積的總和 。 ? VT = 1/4 ?D2h ? D是內(nèi)壁的直徑 ? h是凝膠層析柱床的高度 。 ? 洗脫體積 （ Ve） … 即欲分離物質(zhì)通過層析 ? 柱洗脫下來所需洗脫液 ? 的總體積 。 ? 外水體積 （ V0） … 即存在于柱床內(nèi)凝膠外 ? 面空隙之間的水相體積 ， ? 相應(yīng)于一般層析法中流 ? 動相的體積 。 ? 內(nèi)水體積 （ Ｖｉ ） … 即凝膠顆粒內(nèi)部所含 ? 水相的體積 ， 它可從 ? 干凝膠顆粒重量和吸 ? 水重量求得 。 ? 凝膠干體積 （ Ｖｇ ） Ｖ Ｔ ＝Ｖ ０ +Ｖ ｉ ＋Ｖ ｇ 洗脫體積與Ｖｏ及Ｖｉ之間的關(guān)系 Ｖｅ＝Ｖｏ＋ＫｄＶｉ Ｋｄ＝ （ Ｖｅ－Ｖｏ ） ／Ｖｉ ? Ｋｄ 為樣品組分的分配系數(shù) ， 也可以說 Ｋｄ是 分子量不同的溶質(zhì)在凝膠內(nèi)部和外部的分配系數(shù) 。 ? 它只與 被分離物質(zhì)分子的大小和凝膠顆?？紫兜拇笮》植?有關(guān) ， 而與柱的長短粗細(xì)無關(guān) ， 也就是說它對每一物質(zhì)為常數(shù)與柱的物理條件無關(guān) 。 ? Ｋｄ可通過實驗求得 。 ? Ve為實際測得洗脫體積 。 ? Vo可用不被凝膠滯留的大分子物質(zhì)的溶液（ 最好有顏色以便于觀察如 Hb、 印度黑墨水 ）通過實際測量求出 .Vi可由 gWr求得 （ g為干凝膠重 ,單位為克 ,Wr為凝膠的吸水量以 ml/g表示 ） 。 Ve Vo
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