氨基酸的分離---紙層析法(編輯修改稿)
2025-05-26 12:55 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 培養(yǎng)皿 層析濾紙 鉛筆（直尺） 分液漏斗 吹風(fēng)機(jī) 正丁醇 冰醋酸 1氨基酸標(biāo)準(zhǔn)樣品 1氨基酸混合樣品 1 %水合茚三 酮正丁醇溶液 【 實(shí)驗(yàn)步驟 】 配擴(kuò)展劑： 正丁醇：冰醋酸：水 = 20ml ： 5ml ： 15ml 順序：正丁醇 → 冰醋酸 → 水，放入分液漏斗中，充分混勻。靜置約 10min后分層，放出下層水層，其余的倒入培養(yǎng)皿中。 2. 準(zhǔn)備濾紙 取一張層析濾紙，距紙底邊 2cm處用鉛筆劃一橫線，沿線每隔 號(hào)為點(diǎn)樣處，點(diǎn)樣處也不要太靠近兩側(cè)邊（約距 ），會(huì)產(chǎn)生邊緣效應(yīng)。 （順紙紋方向） 用毛細(xì)管依次吸取標(biāo)準(zhǔn)品氨基酸和混合樣，吸管與濾紙垂直，輕輕接觸紙面，樣品擴(kuò)散直徑小于 3mm。一滴滴完后用 冷風(fēng) (低溫） 吹干，再點(diǎn)第二次，共點(diǎn)三次。 將點(diǎn)完樣的濾紙兩側(cè)面對(duì)齊，用針線縫合，紙的兩邊不能接觸。將點(diǎn)樣后的濾紙直立于培養(yǎng)皿的擴(kuò)展劑中，（點(diǎn)樣的一端在下，擴(kuò)展劑的液面需低于點(diǎn)樣線 1 cm ）當(dāng)溶劑展層至濾紙上沿 2cm處展層結(jié)束，取出濾紙。用鉛筆畫出展層前沿位置，在 通風(fēng)櫥中 用熱風(fēng) 吹干。 5. 顯色 用喉頭噴霧器均勻噴上 ％茚三酮正丁醇溶液，然后用 熱風(fēng)吹干即可顯出各層析斑點(diǎn)。 6. 測(cè)量、計(jì)算： 分別測(cè)量 X、 Y值，計(jì)算各氨基酸的 Rf值。 Rf= X247。 Y 注意事項(xiàng) 手盡量小心接觸濾紙，順紙紋方向?qū)游?
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